1、請描述破壞蛙骨髓的方法(至少兩種)
蛙骨髓細胞染色體玻片標本的製作 一、實驗目的 1、了解動物細胞染色體製片的原理。 2、學習蛙骨髓細胞染色體製片的方法。 3、觀察蛙染色體的數目和形態。二、實驗原理小型動物染色體製片最好、最有效的材料就是骨髓組織。在骨髓細胞中,有絲分裂指數相當高,可直接得到中期細胞。為提高有絲分裂指數,實驗前,於動物腹腔內注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓後,經低滲處理、固定、滴片、空氣乾燥後即可獲得良好的中期分裂相。三、實驗材料、蛙類四、器具及葯品注射器,離心管、解剖器、離心機,冰箱、電子天平,顯微鏡,搪瓷缸,載玻片,燒杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。五、實驗步驟一離心法(適合於個體大的蛙) 1、前處理目的:改變細胞質的粘度,抑制或破壞紡錘體的形成,使染色體縮短和分散,獲得較多中期分裂相。實驗前8-20小時,將蛙稱重,按每克體重10-40ug的劑量(無尾類10-20ug,有尾類30-40ug)經腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液濃度100-1000ug/ml,按蛙大小來配。 2、取骨髓細胞將蛙麻醉,用手術剪剝開腹腔,取下四肢骨,剔凈肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小燒杯中洗一下,用鑷子夾出來,剪掉兩端關節,將裝有0.046mol/l的KCl的注射器從骨一頭插入,沖骨髓細胞於干凈的離心管內,反復沖洗幾次,直到骨變白為止。注意這一過程不要讓組織塊掉入離心管。 3、低滲處理目的:使細胞吸水膨脹,細胞膜易破裂,有助於染色體的分散。當骨髓細胞全部沖入離心管後,開始計時,即低滲開始。室溫下低滲處理30-40分鍾,在此過程中,要用吸管反復吹打。另外取預先洗凈的載玻片放入盛有蒸餾水的搪瓷缸中,置冰箱中冰凍。 4、固定目的:盡快殺死細胞,使細胞盡可能保持原有的狀況,並且還可以去掉細胞質。將離心管兩兩平衡後,對稱放入離心機內,以1000轉/分離心10分鍾,輕輕取出,棄上清液,沿管壁緩慢加入現配卡諾氏固定液6ml左右,並用吸管吹散細胞團,固定30分鍾,平衡後再離心,棄上清液,加卡諾氏固定液進行第二次固定。注意,固定液要現配,每次離心前都要平衡,離心的時間、速度均同第一次。由於每離心一次,細胞要損失30%左右,因此對個體小的蛙第二次固定也可省去,但固定次數少,細胞質不易去掉,影響效果,固定次數多,離心後細胞損失多。這一茅盾的解決有待多次實驗的摸索,原則上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。
2、小鼠骨髓細胞染色體標本制備和觀察實驗報告
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢。很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備)。
3、制備小白鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果?為什...
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4、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果
在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:
提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。
在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。
滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。
小鼠骨髓細胞染色體標本製作:
原理:
由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;
試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;
儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;
實驗步驟
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。
3. 葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。
二、步驟
秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。
5、制備骨髓細胞染色體標本是怎樣的
因為在之前你得到的染色體都處於不同的分裂期,預固定是為了使這些細胞及其染色體都固定在當前所處的時期,便於觀察。
6、臨床:白血病。取材:骨髓。 方法:細胞培養+G顯帶。分析20個染色體分裂相:
這個報告結果的意思是:
染色體檢查總共計數20個細胞分裂相,其中有14個分裂相結果是: 染色體總數46條,其中性染色體是XY,即男性同時未發現染色體異常。
另外6個分裂相是:染色體總數46,性染色體為XY,存在染色體異常,異常表現為: 9號染色體和17號染色體存在意味,即9號染色體和17號染色體相互交換了整條染色體臂並組成了新的穩定染色體。
綜上,標本是由兩種核型組成的嵌合體,且是平衡易位,可能在遺傳中不會造成致死性死胎,流產之類,但是有可能產生具有家族種質性的腫瘤,因為這個核型是能穩定遺傳的,而且不會產生致死性畸變。建議對整個家族進行篩查,以先證者為起點,對家系進行研究,可以確定腫瘤和一行核型的聯系。
7、牛蛙骨髓細胞染色體標本文獻有哪些
蛙骨髓細胞染色體玻片標本的製作
一、實驗目的
1、了解動物細胞染色體製片的原理。
2、學習蛙骨髓細胞染色體製片的方法。
3、觀察蛙染色體的數目和形態。
二、實驗原理
小型動物染色體製片最好、最有效的材料就是骨髓組織。在骨髓細胞中,有絲分裂指數相當高,可直接得到中期細胞。為提高有絲分裂指數,實驗前,於動物腹腔內注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓後,經低滲處理、固定、滴片、空氣乾燥後即可獲得良好的中期分裂相。
三、實驗材料、
蛙類
四、器具及葯品
注射器,離心管、解剖器、離心機,冰箱、電子天平,顯微鏡,搪瓷缸,載玻片,燒杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、實驗步驟
一離心法(適合於個體大的蛙)
1、前處理
目的:改變細胞質的粘度,抑制或破壞紡錘體的形成,使染色體縮短和分散,獲得較多中期分裂相。
實驗前8-20小時,將蛙稱重,按每克體重10-40ug的劑量(無尾類10-20ug,有尾類30-40ug)經腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液濃度100-1000ug/ml,按蛙大小來配。
2、取骨髓細胞
將蛙麻醉,用手術剪剝開腹腔,取下四肢骨,剔凈肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小燒杯中洗一下,用鑷子夾出來,剪掉兩端關節,將裝有0.046mol/l的KCl的注射器從骨一頭插入,沖骨髓細胞於干凈的離心管內,反復沖洗幾次,直到骨變白為止。注意這一過程不要讓組織塊掉入離心管。
3、低滲處理
目的:使細胞吸水膨脹,細胞膜易破裂,有助於染色體的分散。
當骨髓細胞全部沖入離心管後,開始計時,即低滲開始。室溫下低滲處理30-40分鍾,在此過程中,要用吸管反復吹打。
另外取預先洗凈的載玻片放入盛有蒸餾水的搪瓷缸中,置冰箱中冰凍。
4、固定
目的:盡快殺死細胞,使細胞盡可能保持原有的狀況,並且還可以去掉細胞質。
將離心管兩兩平衡後,對稱放入離心機內,以1000轉/分離心10分鍾,輕輕取出,棄上清液,沿管壁緩慢加入現配卡諾氏固定液6ml左右,並用吸管吹散細胞團,固定30分鍾,平衡後再離心,棄上清液,加卡諾氏固定液進行第二次固定。
注意,固定液要現配,每次離心前都要平衡,離心的時間、速度均同第一次。由於每離心一次,細胞要損失30%左右,因此對個體小的蛙第二次固定也可省去,但固定次數少,細胞質不易去掉,影響效果,固定次數多,離心後細胞損失多。這一茅盾的解決有待多次實驗的摸索,原則上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。