1、牛蛙骨髓細胞染色體標本文獻有哪些
蛙骨髓細胞染色體玻片標本的製作
一、實驗目的
1、了解動物細胞染色體製片的原理。
2、學習蛙骨髓細胞染色體製片的方法。
3、觀察蛙染色體的數目和形態。
二、實驗原理
小型動物染色體製片最好、最有效的材料就是骨髓組織。在骨髓細胞中,有絲分裂指數相當高,可直接得到中期細胞。為提高有絲分裂指數,實驗前,於動物腹腔內注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓後,經低滲處理、固定、滴片、空氣乾燥後即可獲得良好的中期分裂相。
三、實驗材料、
蛙類
四、器具及葯品
注射器,離心管、解剖器、離心機,冰箱、電子天平,顯微鏡,搪瓷缸,載玻片,燒杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、實驗步驟
一離心法(適合於個體大的蛙)
1、前處理
目的:改變細胞質的粘度,抑制或破壞紡錘體的形成,使染色體縮短和分散,獲得較多中期分裂相。
實驗前8-20小時,將蛙稱重,按每克體重10-40ug的劑量(無尾類10-20ug,有尾類30-40ug)經腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液濃度100-1000ug/ml,按蛙大小來配。
2、取骨髓細胞
將蛙麻醉,用手術剪剝開腹腔,取下四肢骨,剔凈肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小燒杯中洗一下,用鑷子夾出來,剪掉兩端關節,將裝有0.046mol/l的KCl的注射器從骨一頭插入,沖骨髓細胞於干凈的離心管內,反復沖洗幾次,直到骨變白為止。注意這一過程不要讓組織塊掉入離心管。
3、低滲處理
目的:使細胞吸水膨脹,細胞膜易破裂,有助於染色體的分散。
當骨髓細胞全部沖入離心管後,開始計時,即低滲開始。室溫下低滲處理30-40分鍾,在此過程中,要用吸管反復吹打。
另外取預先洗凈的載玻片放入盛有蒸餾水的搪瓷缸中,置冰箱中冰凍。
4、固定
目的:盡快殺死細胞,使細胞盡可能保持原有的狀況,並且還可以去掉細胞質。
將離心管兩兩平衡後,對稱放入離心機內,以1000轉/分離心10分鍾,輕輕取出,棄上清液,沿管壁緩慢加入現配卡諾氏固定液6ml左右,並用吸管吹散細胞團,固定30分鍾,平衡後再離心,棄上清液,加卡諾氏固定液進行第二次固定。
注意,固定液要現配,每次離心前都要平衡,離心的時間、速度均同第一次。由於每離心一次,細胞要損失30%左右,因此對個體小的蛙第二次固定也可省去,但固定次數少,細胞質不易去掉,影響效果,固定次數多,離心後細胞損失多。這一茅盾的解決有待多次實驗的摸索,原則上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。
2、什麼樣的動物細胞可直接用於染色體標本制備
直接制備的話zd,就算是真皮層分裂旺盛的細胞,得到的分裂相也可能太少了,要制備比較多的染色體分裂相出來的話,可以對外周血液進行增內殖後制備起來多一點的,你可以取大鼠或者兔子靜脈血,肝素鈉抗凝,用細胞培養基(1640培養基混合小牛血清、抗生素、植物凝集素)37攝氏度進行48小時增殖。
當然要是您的條件不成熟的話,可以用小鼠的骨髓進行直接的染色體制備,容效果比真皮層細胞好的多。
3、小鼠骨髓細胞染色體標本制備和觀察實驗報告
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢。很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備)。
4、小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢.很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備).
5、人體哪些細胞可以制備人類染色體標本
人的外周血淋巴細胞培養方法是1960年由Moorhead
提出來的。正常情況下,人外周血小淋巴專細胞都處在G1期(或G0期),屬但在體外給予一定的條件,進行培養,經72
h就可獲得大量的有絲分裂細胞。這種取材簡易、用血量少的培養方法已被廣泛採用。
在培養液中加入植物血凝素(PHA),淋巴細胞受到刺激可轉化為淋巴母細胞,進入有絲分裂。短期培養後,經秋水仙素處理,可抑制細胞分裂時紡錘絲的形成,使細胞分裂停止在中期,同時它可改變細胞質的黏度,引起染色體在細胞質中分散。經低滲和固定,即可得到大量的、分散效果好的染色體分裂象。人體的1ml外周血中一般含有約(1~3)×106個小淋巴細胞,足夠染色體標本制備和分析之用。
6、制備骨髓細胞染色體標本是怎樣的
因為在之前你得到的染色體都處於不同的分裂期,預固定是為了使這些細胞及其染色體都固定在當前所處的時期,便於觀察。
7、製作染色體標本需要採用哪種製片方法?
製片方法有:切片,撕片,壓片。這些都是針對顯微鏡觀察的,製作染色體標本,標本不是用顯微鏡觀察的,直接肉眼觀察,所以我們可以製作染色體模型。
8、動物染色體標本制備的原理及主要步驟
1)動物的選擇,一般用小鼠,其繁殖能力強,易於飼養.我們常用的是它們的骨髓細胞和精巢,因其分裂指數較高,不用體外培養就可以得到分裂中期的細胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或處理時間過長,會導致染色體的過分凝縮或著絲點裂解,最終會引起染色體形態不正常,甚至被破壞或溶解。
3) 低滲處理很關鍵。低滲液的量、處理時間均與細胞的數量有關。低滲過度,細胞會破裂;低滲不足則染色體在一起,分散不開。
4) 離心速度或離心時間也能影響染色體標本的制備。離心速度過大或離心時間過長,則會引起細胞破裂;反之,離心速度過小或離心時間過短,則細胞沉降不下來,則會引起大量細胞的丟失。
5) 固定液要隨用隨配,固定徹底後再打散細胞團塊,否則細胞容易破碎,染色體分散亦受到影響。
6) 載玻片要預冷.冷卻不夠,則會影響染色體的附著和鋪展。
7) 用吸管吹散細胞時用力必須盡量輕柔,用力過大則會造成細胞破裂,而染色體也會彌散在溶液中,在隨後的離心中將會丟失。
8) 滴片時的高度很重要,高度過低細胞不會破裂;過高則染色體過於分散甚至丟失,無法辨別出染色體的准確數量。