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小鼠骨髓細胞提取

發布時間:2020-10-31 22:22:45

1、小鼠骨髓細胞染色實驗中有哪些材料可用作制備染色標本,其基本特性是什麼

在明視野下,若能看清的話就不要染色了。因為在無法觀測清楚時,才會染色。通常染色劑會影響微生物的活性,更多的是使細胞死亡。即使是活性染料也有一定的影響。 根據經驗 不染色完全可以看見顯微結構 細胞膜 細胞壁 液泡 核 基本可以看見 葉綠體隱約可以看見 當然解析度和光圈大小需要調整到最佳狀態 鞭毛可以隱約看見 黴菌放線菌細菌的形態當然是不染色完全可以看 如果想看更細致些 比如線粒體 高爾基體 核膜 微囊體 膜泡等亞顯微結構 需要用特定的分子染料進行染色再進行觀察 如果你不需要做活體實驗而只是觀察的話,染色吧,清晰度好一些。

2、小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片

小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢.很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備).

3、如何提取小鼠骨髓細胞?

1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.

4、如何取小鼠骨髓細胞

1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.

5、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果

在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:

提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。

在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。

滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。

小鼠骨髓細胞染色體標本製作:

原理:

由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;

試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;

儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;

實驗步驟

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。

3.  葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。

二、步驟

秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。

6、小鼠骨髓細胞可以直接用於染色體的製作的原因

骨髓細胞有絲分裂旺盛,所以不需要體外培養就可以直接做實驗。外周血淋巴細胞幾乎都是處在G0或者G1期,一般情況下是不分裂的。在培養基中加入植物凝集素時,淋巴細胞受到刺激時轉化為淋巴母細胞,並開始進行有絲分裂。

7、小鼠骨髓細胞染色體標本制備和觀察實驗報告

首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢。很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備)。

8、單克隆抗體中的骨髓瘤細胞從哪裡提取?是不是在提取小鼠的免疫細胞的胰臟中?

不是提取小鼠胰臟中免疫細胞。是從骨髓中提取癌變的細胞,這類細胞具有永生性,骨髓瘤細胞在體外培養條件下無限增殖,但不能產生抗體。B淋巴細胞能產生抗體,不能在體外增殖。二者融合以後就能無限增殖又能產生抗體。

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