骨髓造血幹細胞培養

1、造血幹細胞體外定向誘導分化，為什麼不用骨髓幹細胞

探討體外誘導人骨髓間充質幹細胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells, hBMSCs)定向誘導分化為心肌樣細胞的實驗條件。 方法:取成人棄骨骨髓,通過全骨髓貼壁法分離培養hBMSCs。在傳至第三代時,篩選具有心肌特異性分化潛能的c-kit~+的hBMSCs細胞克隆,用含20%胎牛血清的低糖DMEM培養液繼續克隆培養。當細胞達到70%融合時,分別用10μmol/l5-氮胞苷(5-azacytidine crystalline,5-aza),100mg/l參麥注射液,10μmol/l5-氮胞苷和100mg/l參麥注射液3組誘導劑誘導hBMSCs。24小時後,更換為含10%胎牛血清的低糖DMEM培養液繼續培養。在誘導3周後,通過顯微鏡下觀察其形態變化。用免疫細胞化學方法檢測心肌特異性標記抗原Desmin和肌鈣蛋白T的表達;用RT-PCR方法檢測心肌特異基因心房利尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和腦鈉肽(brain natriuretic peptide,BNP)表達。 結果:骨髓中含有多種hBMSCs細胞克隆,其中成纖維細胞樣克隆表達c-kit~+。分別用3組誘導劑誘導c-kit~+細胞15天後,部分細胞胞體明顯增粗,可見有些細胞間有融合樣現象發生。誘導3周後,3組都有類似肌管樣細胞出現,細胞短粗,呈不規則的圓柱形,有分支,互相連成網。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin HE)染色後,3組細胞都排列規則,類似於心肌細胞的形態,可見部分細胞有排列規則的橫紋樣結構。免疫細胞化學顯示誘導3周後的hBMSCs,Desmin陽性細胞數目分別是:5-aza組(65.3±4.7%),參麥注射液組(62.3±3.9%),5-aza和參麥注射液組(68.5±2.1%),3組Desmin陽性細胞表達率無顯著差異; cTnT陽性細胞數目分別是:5-aza組(62.2±4.1%),參麥注射液組(63.8±3.4%), 5-aza和參麥注射液組(66.0±6.2%),3組Desmin陽性細胞表達率無顯著差異。陰性對照組和未分化的hBMSCs均無Desmin和cTnT的表達。RT-PCR顯示3種不同的誘導劑誘導hBMSCs3周後都有ANP,BNP的表達,未分化的hBMSCs無ANP,BNP的表達。 結論:5-aza和中葯可以誘導c-kit~+的hBMSCs細胞克隆分化為心肌樣細胞。體外誘導成的心肌樣細胞表現為未成熟心肌細胞的結構和功能特徵。證明骨髓中含有多種幹細胞克隆,c-kit可作為篩選hBMSCs向心肌樣細胞分化的一項檢測指標。篩選具有心肌特異性分化潛能的hMSCs可提高誘導分化率。

2、關於造血幹細胞

1.根據我國《獻血者健康檢查要求》「……眼底有變化的高度近視等」不能獻血。
因為獻血有可能破壞眼壓平衡，輕微的血壓波動對於高度近視者可能造成血管痙攣，影響視力。
所以，從保護獻血者角度出發不提倡獻血。
2.捐獻造血幹細胞一般就是捐獻骨髓，一般骨髓捐獻的採集量是50-100ml（採集直接輸入HLA匹配受體），如果是骨髓體外培養回輸的話採集量是10ml。如果想要捐獻骨髓，建議個人慎重考慮，官方聲明捐獻骨髓對身體無害，事實上捐獻骨髓對身體是有很大影響的。人體骨髓腔中含紅骨髓和黃骨髓，當人體少量失血（小於200CC）時，紅骨髓產生造血幹細胞，造血幹細胞分化成血細胞補充人體所失血細胞；當人體大量失血（小於800CC）時，人體需要及時輸血，體內少量黃骨髓轉變為紅骨髓，加速造血幹細胞的生成；當人體大量失血大於800CC時，人體極度危險，不及時輸血即死亡。人體中的紅骨髓會隨著年齡的增長而不斷減少，所以捐獻紅骨髓後，在未來的幾年裡需要合理的調理身體，紅骨髓的含量會得到一定的恢復。

3、造血幹細胞與骨髓細胞有什麼區別

指導意見：造血幹細胞也稱為多能造血幹細胞，是骨髓中的原始造血幹細胞，具有自我更新和分化成各種血細胞的功能，而血液中主要是骨髓造血幹細胞分化成熟後才釋放進去的，造血幹細胞主要還是存在於骨髓中，那裡的微環境適合造血幹細胞生長繁殖和分化。

4、造血幹細胞0.4

造血幹細胞是體內為數不多的非貼壁細胞，非常適合於靜脈注射，並且血管注冊的造血幹細胞非常容易通過血液循環迅速到達全身各處，起到全身性組織器官的抗衰老作用，是「返老還童」的優選方法之一， 然而造血幹細胞在體內通常情況下存在於骨髓中，只有打動員劑之後才能釋放到血液中，動員後獲得的造血幹細胞數量也有限，因為做一次全身性抗衰老的注射，需要1-10個細胞，因此動員獲得的造血幹細胞需要在體外迅速放大擴增之後才能達到回輸所需要的，其中放大培養過程中，有兩個要素需要考慮：1）擴增所需的細胞數所需要的時間；2）擴增後後的造血幹細胞其核型及分化潛能性要保持不變。為了優選一種好的培養方法，我們系統比較了Invitrogen、Lonza、StemCell、佰通生物、賽業、百恩維的同類產品：

1） 培養基穩定性：造血幹細胞表面抗原的比例、核型分析的情況以及分化成T細胞、DC-CIK細胞、NK細胞的潛能與擴增前的一致性。 我們發現Invitrogen、Lonza、佰通生物的穩定性最佳，基本保持在擴增前的80%以上，核型分析沒有發現異常。
2） 擴增速度：從單位時間獲得的細胞數量多少來評估，佰通生物的AdvCell系列造血幹細胞無血清培養基效果比其他培養基效果稍快些。其中佰通生物的一款AdvCell造血幹細胞無血清完全培養基配有細胞增殖所需要的全部因子，操作簡便，效果最佳，信價比也不錯。

5、骨髓移植與造血幹細胞移植有什麼區別？

一、指代不同

1、骨髓移植：是通過靜脈輸注造血干、祖細胞，重建患者正常造血與免疫系統，從而治療一系列疾病的治療方法。

2、造血幹細胞移植：患者先接受超大劑量放療或化療（通常是致死劑量的放化療），有時聯合其他免疫抑制葯物，以清除體內的腫瘤細胞、異常克隆細胞，然後再回輸采自自身或他人的造血幹細胞，重建正常造血和免疫功能的一種治療手段。

二、特點不同

1、骨髓移植：使用預處理方案可以製造空間、免疫抑制以及清除疾病。預處理方案的強度以既可以達到最大限度的防止移植排斥、又可達到患者對其副作用的耐受為目標，故有多種預處理方案可供選擇。

2、造血幹細胞移植：血緣關系供者造血幹細胞移植和無血緣關系供者造血幹細胞移植（即無關移植）；按移植物種類分為外周血造血幹細胞移植、骨髓移植和臍帶血造血幹細胞移植。

三、發展不同

1、骨髓移植：隨著移植技術的提高，其療效已經漸趨穩定。移植供者的選擇困難成為制約移植的主要障礙。HLA不完全相合的親屬供者、HLA單倍體相合親屬供者及無關供者的應用及相關技術改進成為臨床研究的熱門課題，非清髓技術也帶來了觀念上的革命。

2、造血幹細胞移植：有很多先進的葯物從遺傳學水賓士療這些患者，但是異基因造血幹細胞移植仍是治癒這些疾病的惟一治療手段。

6、造血幹細胞有哪些用途？

幹細胞在治療癌症、心臟病、糖尿病、皮膚燒傷等等人類許多頑症方面都有不可替代的重大作用。如帕金森氏綜合症患者主要是神經細胞在功能上出現紊亂，如果能給患者注入健康的神經細胞，就會有治療效應；如果能從胚胎中鑒別和提取到能生成黑色素細胞的幹細胞，就可以用這樣的幹細胞很容易地分化培養出大量黑色素細胞，以治療白癜風。

最新的研究發現，幹細胞不但能再生某些組織，而且可以衍生成與其來源不同的細胞類型。如把血液幹細胞放到腦組織中，在大腦環境中，血液幹細胞有可能分化成神經細胞。反過來，如果將分離出的神經幹細胞移植到骨髓里，它還可以變成血液細胞。正是由於人的胚胎幹細胞培養成功和組織幹細胞對人類健康的潛在價值，因而引發了世界范圍內的幹細胞研究熱。

近年來，科學家發現臍血中也含有豐富的造血幹細胞。臍血是為胎兒輸送養料的運輸部隊，胎兒在臍血的哺育下健康地成長。過去，當胎兒離開母體後，臍血就被認為是完成了它的歷史使命，棄之無用了。而現在人們的看法隨著醫學研究的飛速進展而發生了重大變化。

原來，新生兒出生後，其臍帶血里殘存有較豐富的造血幹細胞，且在臍帶血中所佔的比例並不亞於骨髓內的造血幹細胞。臍血中的幹細胞比成人骨髓中的幹細胞更原始，有利於重建永久的造血功能，而且發生排斥反應的機會少，對組織配型的要求也不那麼嚴格。而且臍血中的幹細胞含量非常豐富，比骨髓中的幹細胞含量要多10倍，般只需50毫升就能夠滿足手術的需要。一份臍血就能挽救一個生命。臍帶血的來源比骨髓的來源容易獲得，而且是不含白血病細胞的正常血，它的移植不但能克服了異體骨髓移植中骨髓來源不易的困難，並且能避免自體骨髓移植後的疾病復發問題。因此，採用來源於臍帶血的造血幹細胞取代骨髓造血幹細胞進行的移植方法，已經引起各方面的重視。臍帶血移植是新開展的一項白血病治療手段，目前應用於兒童白血病的治療上，已有令人滿意的療效，現正在探索應用於成人的白血病治療上。

1981年1月，我國醫學工作者首次對一例重症乙型地中海貧血患者實施臍血移植手術。臍血被一滴滴輸入患者靜脈。在醫護人員的精心護理下，患者平穩地度過了危險期。經分子生物學技術檢測，供者的臍血幹細胞已植入患者體內並生長、繁殖，代替了患者原有的造血功能，手術獲得了成功。

7、如何成為骨髓志願者

凡年齡在18-55周歲，身體健康，經下列血液檢查合格者，都可以成為造血幹細胞捐獻者。

丙氨酸氨基轉移酶（ALT）≤40單位

乙型肝炎病毒表面抗原：陰性

丙型肝炎病毒抗體：陰性

艾滋病病毒抗體：陰性

梅毒試驗：陰性

如果您適齡、身體健康（符合無償獻血條件）、志願捐獻造血幹細胞，可與各地紅十字會（或者中華骨髓庫分庫）的熱線電話聯系報名、填寫志願捐獻書及有關表格，並抽取6～8毫升血液。組織配型實驗室將會對您的血液進行HLA分型等檢驗，並把您的所有相關資料錄入中國造血幹細胞捐獻者資料庫的計算機資料庫中。這樣您就成為捐獻造血幹細胞的志願者了。

捐獻造血幹細胞一般就是捐獻骨髓，一般骨髓捐獻的採集量是50-100ml（採集直接輸入HLA匹配受體），如果是骨髓體外培養回輸的話採集量是10ml。如果想要捐獻骨髓，建議個人慎重考慮，官方聲明捐獻骨髓對身體無害，事實上捐獻骨髓對身體是有很大影響的。人體骨髓腔中含紅骨髓和黃骨髓，當人體少量失血（小於200CC）時，紅骨髓產生造血幹細胞，造血幹細胞分化成血細胞補充人體所失血細胞；當人體大量失血（小於800CC）時，人體需要及時輸血，體內少量黃骨髓轉變為紅骨髓，加速造血幹細胞的生成；當人體大量失血大於800CC時，人體極度危險，不及時輸血即死亡。人體中的紅骨髓會隨著年齡的增長而不斷減少，所以捐獻紅骨髓後，在未來的幾年裡需要合理的調理身體，紅骨髓的含量會得到一定的恢復。

8、捐獻骨髓造血幹細胞有害有益??詳細點,謝謝

我沒有捐過，沒有切身體會，但我告訴你一個真實的事件，是我碰到的一位捐獻造血幹細胞的熱心青年，在捐完造血幹細胞的一年裡，他的面色都不是太好，每隔一個月左右都要去醫院檢查，常規檢查血常規時總發現淋巴比例偏高（50%以上），而正常人中性佔50-70%淋巴佔20-40%。以上是我所見，我們姑且稱之為「後遺症」，理論上刺激造血之後可以較快恢復，但這些刺激量的控制卻很難，理論上捐造血幹細胞對健康影響不大，但實際上還是三思而後行。

9、請高手解答：骨髓細胞，骨髓幹細胞，骨髓造血幹細胞，是什麼關系？

骨髓細胞，骨髓幹細胞，骨髓造血幹細胞
由於生理變異和不同的調查資料，正常骨髓象各系統各階段細胞比值變動范圍較大，所以正常骨髓象實際含義是正常范圍骨髓象，下降數據可做為骨髓塗片中各種血細胞正常值的參考： 粒細胞系統佔比例最大，約1/2強。一般原始粒細胞<0.02，早幼粒細胞<0.05，以中性桿狀核最多，其比值大於分葉核細胞，也多於晚幼粒細胞，嗜酸性粒細胞<0.05，嗜鹼性粒細胞<0.01。 紅細胞系統占骨髓第二位（有核紅細胞），約佔1/5左右，以晚幼紅細胞居多，中幼紅細胞次之，原始紅細胞<0.01，早幼紅細胞一般<0.05，無巨幼紅細胞。 淋巴細胞約佔1/5左右，小兒偏高，有時可達0.4，單核細胞一般<0.04，漿細胞一般小於0.015。 非造血細胞，如網狀細胞、吞噬細胞、組織嗜鹼性細胞等可少量存在，它們的比值雖然很低，但卻骨髓有成份的標志。
骨髓間充質幹細胞（mesenchymal stem cells,MSC）是幹細胞家族的重要成員，來源於發育早期的中胚層和外胚層。MSC最初在骨髓中發現，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進幹細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注。如間充質幹細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、 肝、心肌、內皮等多種組織細胞，連續傳代培養和冷凍保存後仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用於衰老和病變引起的組織器官損傷修復。骨髓間充質幹細胞由於其來源廣泛，易於分離培養，並且具有較強的分化潛能和可自體移植等優點，越來越受到學者們的青睞，被認為是不久即將被引入臨床治療的最優幹細胞。
造血幹細胞（ Stem cell ，SC）是指骨髓中的幹細胞，具有自我更新能力並能分化為各種血細胞前體細胞，最終生成各種血細胞成分，包括紅細胞、白細胞和血小板，它們也可以分化成各種其他細胞。它們具有良好的分化增殖能力，幹細胞可以救助很多患有血液病的人們，最常見的就是白血病。但其配型成功率相對較低，且費用高昂。捐獻造血幹細胞對捐獻者的身體並無很大傷害。