1、成熟漿細胞12%,幼漿細胞3.5%能診斷骨髓瘤嗎
患者男性,70歲。胸椎痛半年余,一直未能確診,保守治療症狀未緩解。半年前開始出現胸椎痛,當時做了MR提示胸椎7,9,11壓縮骨折,PET-CT未見異常代謝。骨髓:骨髓增生減低,漿細胞增高(12%),幼漿細胞3.5%。血輕鏈減低,尿輕鏈K增高(555mg/dl)。最近再次復查:紅細胞2.56,血紅蛋白85;骨髓:有核細胞、粒系、紅系均增生明顯活躍,粒:紅比2.6:1,粒系形態正常,紅系可見雙核幼紅細胞,淋巴細胞比值偏低,可見幼淋,漿細胞14.5%,其中幼漿細胞4%,可見異常形態漿細胞,全片巨核細胞42個。骨髓活檢:見小淋巴樣細胞片狀增生,白血病不能除外;IGH基因陽性;血IgG、IgA、IgM、輕鏈均減低;尿輕鏈K 1928mg/dl。
2、漿細胞與骨髓瘤融合前的兩次篩選的方法是什麼?
單克隆抗體制備過程中經過兩次篩選
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的。
第一次篩選的原理與方法:細胞融合後,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵。普遍採用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷酸(T)。其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(「D途徑」),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而HAT培養液中氨基喋呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的「D途徑」。另一條途徑是應急途徑或補救途徑(「S途徑」),它是利用次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應的核苷酸,兩種酶缺一不可。因此,在HAT培養液中,未融合的效應B細胞和兩個效應B細胞融合的「D途徑」被氨基喋呤阻斷,雖「S途徑」正常,但因缺乏在體外培養液中增殖的能力,一般10d左右會死亡。對於骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言,由於通常採用的骨髓瘤細胞是次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶缺陷型(HGPRT)細胞,因此自身沒有「S途徑」,且「D途徑」又被氨基喋呤阻斷,所以在HAT培養液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤細胞與效應B細胞相互融合形成的雜交瘤細胞,既具有效應B細胞的「S途徑」,又具有骨髓瘤細胞在體外培養液中長期增殖的特性,因此能在HAT培養液中選擇性存活下來,並不斷增殖。
第二次篩選的原理和方法:在實際免疫過程中,由於採用連續注射抗原的方法,且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應B淋巴細胞,因此,從小鼠脾臟中取出的效應B淋巴細胞的特異性是不同的,經HAT培養液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異,所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞。通常採用有限稀釋克隆細胞的方法,將雜交瘤細胞多倍稀釋,接種在多孔的細胞培養板上,使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞(理論上30%的孔中細胞數為0時,才能保證有些孔中是單個細胞),再由這些單細胞克隆生長,最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養。因此,單克隆抗體制備過程中,兩次篩選的原理和方法是不相同的。 單克隆抗體制備的基本原理與過程 原理: B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去,因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,再進一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力,又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力,將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術。 過程 1)免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多採用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決於所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備,也可採用脾內直接免疫法。 2)骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前,骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選,防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性(恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活)。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養,融合前24h換液一次,使骨髓瘤細胞處於對數生長期。 3)細胞融合的關鍵: 1技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。 2融合試驗最大的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。 4)陽性克隆的篩選 應盡早進行。通常在融合後10天作第一次檢測,過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、准確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質,以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡便,RIA法最准確。陽性克隆的篩選應進行多次,均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。 5)克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體。克隆化應盡早進行並反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的,有丟失染色體的傾向。反復克隆化後可獲得穩定的雜交瘤細胞株。克隆化的方法很多,而最常用的是有限稀釋法。 (1)顯微操作法:在顯微鏡下取單細胞,然後進行單細胞培養。這種方法操作復雜,效率低,故不常用。 (2)有限稀釋法:將對數生長期的雜交瘤細胞用培養液作一定的稀釋後,按每孔1個細胞接種在培養皿中,細胞增值後成為單克隆細胞系。第一次克隆化時加一定量的飼養細胞。由於第一次克隆化生長的細胞不能保證單克隆化,所以為獲得穩定的單克隆細胞株需經2~3次的再克隆才成。應該注意的是,每次克隆化過程中所有有意義的細胞都應冷凍保存,以便重復檢查,避免丟失有意義的細胞。 (3)軟瓊脂法:將雜交瘤細胞稀釋到一定密度,然後與瓊脂混懸。在瓊脂中的細胞不能自由移動,彼此互不相混,從而達到單細胞培養的目的。但此法不如有限稀釋法好。 (4)熒光激光細胞分類法:用抗原包被的熒光乳膠微球標記雜交瘤細胞,然後根據抗原與雜交瘤細胞結合的特異性選出細胞,並進行單細胞培養。 6)細胞的凍存與復甦 7)大規模單克隆抗體的制備 選出的陽性細胞株應及早進行抗體制備,因為融合細胞隨培養時間延長,發生污染、染包體丟失和細胞死亡的機率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養法,即將雜交瘤細胞在體外培養,在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備,一般應用無血清培養基,以利於單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍採用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠,先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射,一周後將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周後即有明顯的腹水產生,每隻小鼠可收集5~10ml的腹水,有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高,每毫升可達數毫克甚至數十毫克水平。此外,腹水中的雜蛋白也較少,便於抗體的純化。 摘要 在單克隆抗體制備中兩次提到篩選問題,對於兩次篩選的方法和目的始終是一些人的困惑,那麼兩次篩選 的目的和方法到底是什麼。 單克隆抗體制備過程中兩次提到了篩選,對於兩次篩選中的目的和方法許多人也存在疑惑,那麼到底是如何篩選的呢?現總結如下: 第一次篩選: 首先在(效應)B淋巴細胞和骨髓瘤細胞進行雜交時可能出現的情況應該先弄清楚, (一)可能的情況有: 1 (效應)B淋巴細胞和(效應)B淋巴細胞的融合 2 (效應)B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的融合(即雜交瘤細胞) 3 骨髓瘤細胞和骨髓瘤細胞的融合(即瘤瘤細胞) 4 單個骨髓瘤細胞 5 單個(效應)B淋巴細胞 (二)篩選的目的————獲得雜交瘤細胞 (三)篩選的方法 用選擇性培養基來完成,即HAT培養基。含有次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶,其中氨基喋呤可阻斷DNA合成的主要途徑。主要途徑阻斷後,依靠應急途徑即在HGPRT(次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶)和TK(胸苷激酶)作用下,利用胸腺嘧啶和次黃嘌呤合成DNA,缺少其中一種,DNA合成不能發生。用於雜交的骨髓瘤細胞系均由經有毒葯物誘導而成選擇產生的代謝缺陷型細胞,細胞內均無TK或HGPRT,所以單個或融合骨髓瘤細胞在HAT培養液中將死亡。B細胞雖然有HGPRT和TK,但在體外通常培養條件下,尤其是在單個細胞環境下難於長期存活和增殖傳代。因此只有雜交瘤細胞才能在HAT培養液中生長繁殖。 所以通過以上方法可以選擇出雜交瘤細胞,但雖然都是雜交瘤細胞,但可能是同一抗原的不同抗原決定基刺激產生的。所以產生抗體是不純的。如果不進一步提純,這樣得到的是多克隆抗體。所以就有了第二次篩選。 第二次篩選 要想獲得單克隆抗體,所以必須得到由一個細胞分裂而成的一個細胞群, 由這樣的細胞群產生的抗體才是真正意義的單克隆抗體。 (一) 篩選的目的 篩選只針對某一種特定的抗原決定簇產生抗體的雜交瘤細胞,即得到由一個細胞分裂而成的一個細胞群並且能產生所需抗體 (二)篩選的方法 1、分離單個細胞置入多孔培養板的每個孔中培養 2、檢測每孔細胞是否產生所注射抗原的抗體(即教材插圖中提到的選出能產生特定抗體的細胞群)所以篩選的條件是兩層意思:單個細胞單孔培養保證每個孔中的細胞在產生抗體時是針對同一抗原的同一抗原決定簇產生的的,但每個孔中細胞卻不一定都能產生抗體,把那些不產生抗體的細胞淘汰,對能分泌針對抗原某一決定簇抗體的陽性細胞選擇下來繼續克隆,從而保證大量的生產所需抗體。 3、對選擇下來的細胞進行克隆方法有兩種:一種可以在體外培養;一種可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可從中提取所需要的單克隆抗體。
3、為什麼不用漿細胞和骨髓瘤細胞進行融合
其實就是漿細胞與骨髓瘤細胞融合。
教材中說的是經免疫的B細胞,也就是漿細胞。
漿細胞(plasma cell),又稱效應B細胞。漿細胞大多見於消化管和呼吸道固有膜的結締組織內。細胞較小,圓形或卵圓形,核圓但偏於細胞一側,染色質粗,沿核膜呈輻射狀排列成車輪狀。細胞質呈嗜鹼性,染為藍色。在靠近核處,有一著色淺的區域。近細胞核處有一色較淺而透明的區域。電鏡下可見細胞質內含大量密集的粗面內質網,淺染區是高爾基復合體所在的部位。漿細胞來源於B細胞。
4、漿細胞性骨髓瘤是怎麼回事
多發性骨髓瘤(漿細胞性骨髓瘤;骨髓瘤病)是一種進行性的腫瘤性疾病。其腫瘤細胞起源於骨髓中的漿細胞,而漿細胞是B淋巴細胞發育到最終功能階段的細胞。因此多發性骨髓瘤可以歸到B 淋巴細胞淋巴瘤的范圍。目前WHO將其歸為B細胞淋巴瘤的一種,稱為漿細胞骨髓瘤/漿細胞瘤。其特徵為骨髓漿細胞異常增生伴有單克隆免疫球蛋白或輕鏈(M 蛋白)過度生成,極少數患者可以是不產生M蛋白的未分泌型MM。多發性骨髓瘤常伴有多發性溶骨性損害、高鈣血症、貧血、腎臟損害。由於正常免疫球蛋白的生成受抑,因此容易出現各種細菌性感染。發病率估計為2~3/10萬,男女比例為1.6:1,大多患者年齡>40歲。
5、漿細胞骨髓瘤常用什麼葯,食療注意哪些方面。
得了骨髓瘤吃什麼食物好多發性骨髓瘤患者忌口應該科學合理,因時節,因病,因人而異,如夏天不宜食用溫燥性的食物,冬季則應該避免涼冷食物,多發性骨髓瘤患者飲食宜清淡,多發性骨髓瘤患者病人應忌燥熱傷陰食品。油炸、腌制、煎制、熏制、烤制的視頻在烹制過程中,因高溫,腌漬等等方法,容易產生致癌物質,病人更應該少吃。那麼,得了骨髓瘤吃什麼食物好。多發性骨髓瘤患者應該注意食物一定要濡軟,不要吃過硬和有渣、煎炸的食物,以防引起腫瘤表面破潰,引起大出血。多發性骨髓瘤患者忌口陳舊變質或刺激性的東四,少吃薰、烤、腌泡、油炸、過鹹的食品,主食粗細糧搭配,以保證營養平衡。骨髓瘤患者的飲食忌宜:1、宜(1)骨髓瘤患者宜多吃具有抗骨癌作用的食物:山羊血、鱟、蟹、羊腦、海參、牡蠣、鱉、龜、沙蟲、鹿血、大葉菜、麥片、小莧菜、油菜籽、沙棗、香芋、栗、野葡萄。(2)骨髓瘤患者宜吃具有止痛消腫作用的食物:蘆筍、藕、慈姑、山楂、獺肉、鷺肉、蟹、鱟、海龜、海蛇。(3)骨髓瘤患者宜吃預防放療、化療副作用的食物:蜂乳、核桃、獼猴桃、銀耳、香姑、大頭菜、花粉。多發性骨髓瘤食療方子:1、抑制骨髓過度增生食療方桃花魚片:青魚肉適量,桃仁酥10g。魚肉切絲,共炒熟即可。適用於各型多發性骨髓瘤。2、抗血栓食療方山楂甜羹:山楂50g,紅花50g。煮羹作點心食。適用於伴有高粘滯血症的多發性骨髓瘤患者。3、補血、抗消耗食療方黃芪銀耳湯:黃芪9g,銀耳12g,加水300ml,文火煮1小時加冰糖適量,每日服一次。治療多發性骨髓瘤緩解期,氣陰虛,口乾,盜汗,失眠者。2、忌(1)骨髓瘤患者需忌煙、酒。(2)骨髓瘤患者忌辛辣刺激性食物,如蔥、蒜、姜、花椒、辣椒、桂皮等。(3)骨髓瘤患者忌肥膩食物。(4)骨髓瘤患者忌發物以上內容就是我們詳細介紹的有關得了骨髓瘤吃什麼食物好的知識,希望可以幫助到多發性骨髓瘤患的患者以及家屬。同時作為我們每一個人來說,為了自己和家人能夠更好的學習,工作和生活,我們更應該做好預防保健工作,盡量避免疾病的侵入。或者異常腫物需要考慮髓外漿細胞瘤或者澱粉樣變。
6、骨髓中有漿細胞3.5,說明是骨髓瘤嗎
初步可以判斷是骨髓瘤,但還需要其他檢查結果,並判斷分型。
主要標准
組織學活檢證實漿細胞瘤
骨髓漿細胞增多 ≥30%
過量M蛋白存在
-IgG>3.5 g/dL(血清)
-IgA >2 g/dL(血清)
-輕鏈 (本周氏蛋白) ≥1 g/24小時
次要標准
骨髓漿細胞增多 10%~29%
M蛋白存在,但未達到主要標准中的規定
溶骨性病變
血清中正常免疫球蛋白減少(低丙種球蛋白血症)
-IgM<50 mg/dL
-IgA <100 mg/dL
-IgG<600 mg/dL
要確診多發性骨髓瘤,患者必須至少符合:
1個主要標准+1個次要標准,或3個次要標准
7、骨髓瘤細胞與成熟漿細胞的區別
漿細胞免疫學檢查
隨著對MM認識的逐漸深入, 人們越來越重視骨髓瘤細胞免疫表型的相關特徵及其對MM的診斷、治療和預後等臨床意義。在臨床上, 通過檢測細胞表面所表達抗原的強弱、異常抗原的出現, 包括有無細胞內免疫球蛋白的輕鏈限制性, 可以把骨髓瘤細胞和正常漿細胞區別開來。正常漿細胞表面強表達CD38和CD27, 表達CD138, 且無輕鏈限制性, 與正常成熟B細胞相比, CD45和CD19的表達較弱, 不表達CD56、CD117、CD28, 同時不表達B系抗原如CD20、CD22。典型的骨髓瘤細胞免疫分型特點為:異常表達CD28、CD117、CD20、CD56、CD13、CD33、CD27和弱表達CD38, 不表達CD19和CD45, 並且有輕鏈限制性。
漿細胞免疫標記對反應性漿細胞增多症與克隆性漿細胞增生的鑒別有一定價值, 並可用於微小殘留病灶的檢測。但在鑒別良、惡性漿細胞病時, 應同時結合其它指標, 如漿細胞形態學、M蛋白鑒定等。
MM骨病標志物
高達90%的MM在初診時或在病程中出現骨質破壞, 其本質為溶骨性病變, 大多難以痊癒, 表現為骨痛、溶骨性病變、彌漫性骨質疏鬆[37]。60%以上的患者發生病理性骨折。由於MM患者的破骨細胞活性增強而成骨細胞活性相對受抑, 導致骨質吸收、破壞增強而成骨、骨的重塑減少, 因此臨床上除影像學檢查外, 反映骨質破壞的標志物也可用於MM骨病檢測。
近年來, 關於細胞遺傳學異常的相關研究以及對骨髓微環境越來越深的理解, 均為MM的發病機制提供更多的依據; 也為新的聯合治療方案和新葯研發奠定了基礎[39]。同時實驗技術的進步使得臨床的診斷得到不斷提高。
8、骨髓瘤細胞是不是癌細胞?
骨髓瘤是起源於骨髓中漿細胞的惡性腫瘤,是一種較常見的惡性腫瘤。有單發性和多發性之分,以後者多見。易累及軟組織,晚期可有廣泛性轉移,但少有肺轉移。較多見於脊柱,占脊柱原發腫瘤的10%,以腰椎部多見。好發年齡多在40歲以上,男性與女性之比約2∶1。 病因病理: 腫瘤血運豐富呈暗紅色或深紅色,較脆軟。鏡下可見瘤體主要由大量密集的瘤細胞組成,間質極少。瘤細胞多呈圓形或卵圓形,但具有不同程度的幼稚性。按分化程度的差異,可分為高分化型(小細胞型)及低分化型(大細胞型)兩種。前者分化較成熟,體積小,具有圓形而偏心性的核,染色質呈車輪狀,亦稱漿細胞型骨髓瘤;後者分化差,體積大,有時有雙核,核仁明顯,核分裂較多見,亦稱網狀細胞型骨髓瘤。 主要症狀是持續的脊柱疼痛,呈進行性加重。多發者其痛范圍很廣。約40%~50%的患者伴有病理性骨折。易出現截癱和神經根受壓症狀。 解毒壯骨中葯一方面可以增強機體免疫功能,首先可誘導骨髓瘤細胞凋亡,減少骨髓瘤細胞;其次可增強骨密度,防治骨質疏鬆、病理性骨折; 用解毒活血中葯,祛除蘊結在骨髓的熱毒;補腎壯骨中葯,恢復骨髓正常造血,促使骨骼再鈣化。 建議採用純中醫中葯治療 患病早期得到治療的病例,幾乎全部有效,並可獲得完全緩解,達到臨床治癒,長期健康生存;對於晚期病例,可以改善臨床症狀,減輕病人痛苦,延長生存期。
9、為什麼制備單克隆抗體不是直接用漿細胞和骨髓瘤細胞融合,而要用B細胞呢?
其實就是漿細胞與骨髓瘤細胞融合。教材中說的是經免疫的B細胞,也就是漿細胞。漿細胞(plasma cell),又稱效應B細胞。漿細胞大多見於消化管和呼吸道固有膜的結締組織內。細胞較小,圓形或卵圓形,核圓但偏於細胞一側,染色質粗,沿核膜呈輻射狀排列成車輪狀。細胞質呈嗜鹼性,染為藍色。在靠近核處,有一著色淺的區域。近細胞核處有一色較淺而透明的區域。電鏡下可見細胞質內含大量密集的粗面內質網,淺染區是高爾基復合體所在的部位。漿細胞來源於B細胞。
10、骨髓瘤怎麼治啊
您好!
不知是不是要了解漿細胞骨髓瘤的治療。
漿細胞骨髓瘤又稱多發性骨髓瘤,是由於漿細胞或產生免疫球蛋白的淋巴樣漿細胞過度增殖和聚集,破壞了骨髓造血功能,導致貧血、出血,同時引起骨骼破壞、骨折、高鈣血症及單克隆免疫球蛋白異常增多的疾病。
骨髓瘤根據發生的部位、免疫球蛋白類型及症狀可分為多種,對於孤立性骨髓瘤主要採用放療,對於冒煙型骨髓瘤多定期觀察,對於多發性骨髓瘤現在多採取聯合化療、骨髓移植、中葯治療為主。
建議:做骨髓塗片、活檢、免疫球蛋白、微球蛋白、X片、尿蛋白等相關檢查,明確類型和病情,選擇個性化治療方案。