骨髓嵌合體小鼠

1、嵌合體形成的原因

卵裂過程中發生染色體的不分離或丟失以及結構畸變就會造成嵌合體產生。

嵌合體
遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體，亦指染色體異常類型之一。有時也有同一器官出現不同性狀的生物體的意思。出現該病狀的人員往往伴隨精力極度旺盛,有時出現多重人格的精神錯亂症狀。目前臨床還出現偶爾患者血型變換的症狀。

2、嵌合體形成的原因有哪些？

回答如下：

卵裂過程中發生染色體的不分離或丟失以及結構畸變就會造成嵌合體產生。

3、如何設計條件性基因敲除小鼠模型

小鼠和大鼠可謂是生命科學實驗室里的明星,成功的小鼠和大鼠模型可謂是生命科學的好幫手.很多人可能想自己設計或是了解條件性基因敲除小鼠,在此做個小結,供大家參考.
條件性基因敲除小鼠的設計利用了Cre/LoxP或Flipe/Frt原理.它們都是位點特異性重組酶系統.這里以Cre/LoxP系統為例.比如在待敲除的一段目標DNA序列的兩端各放置一個loxP序列,得到flox(flanked by loxP)小鼠.將flox小鼠與帶有細胞特異性表達Cre的小鼠交配繁殖,以獲得在特定細胞里把目標基因敲除掉的小鼠,即條件性基因敲除小鼠.此外,若與控制Cre表達的其他誘導系統(比如CreERT2)相結合,還可以對某一基因同時實現時空兩方面的調控.
Cre/loxP系統來源於噬菌體,可以介導位點特異的DNA重組.該系統含有兩個組成成分：一個是一段長34bp的DNA序列(LoxP序列),含有兩個13 bp的反向重復序列和一個8 bp的核心序列.LoxP的方向由中間這8個鹼基決定.這段LoxP序列是Cre重組酶識別的位點.令一個組成部分是Cre重組酶.它是由噬菌體編碼的一種由343個氨基酸組成的蛋白.Cre可以介導兩個LoxP位點的重組,從而引起兩個LoxP之間DNA序列的缺失.如果將Cre重組酶cDNA通過基因工程的手段置於組織或細胞特異性啟動子之下,可以得到Cre組織/細胞特異性表達的Cre小鼠,也叫Cre工具小鼠.跟Flox小鼠交配之後,可以得到條件性基因敲除小鼠.
所謂Flox小鼠是指在某個基因的某個外顯子兩側各放一個LoxP序列.這段序列就是Flanked by LoxP,也就叫做Flox小鼠.這種Flox小鼠一般要通過設計構建打靶載體、胚胎幹細胞重組、囊胚顯微注射、和嵌合體小鼠傳代來獲得.這種小鼠跟Cre工具小鼠交配,由於Cre的表達,介導兩個LoxP位點序列的重組,從而敲除兩個LoxP之間的序列.由於不同Cre工具小鼠的Cre表達有組織/細胞特異性,就可以達到在不同組織、細胞里特異性敲除目的基因的目標.比如上皮細胞、胸腺細胞、T細胞、B細胞、心肌細胞、腸道、肺臟等.
那如何設計條件性基因敲除小鼠呢?這里所說的設計主要是Flox小鼠的設計.所謂條件性敲除,是說除了特定細胞外,其它細胞裡面沒有任何的基因表達異常.一般情況下,不要在第一個外顯子前面放置LoxP序列.因為第一個外顯子前面一般是啟動子.放置LoxP序列有可能會破壞或改變啟動子活性.條件性敲除一般是敲掉最早引起移碼突變的外顯子.這樣的話,最好不要敲除有起始密碼子ATG的外顯子.否則的話,基因可能會利用ORF內的ATG編碼一個缺少部分N端序列的蛋白,這個蛋白很可能有全部或部分野生蛋白的功能.在選擇要敲除的外顯子的時候(各放一個LoxP在一個外顯子的兩側),該外顯子的鹼基數目不能是3N,否則新基因pre-RNA拼接得到的mRNA不能產生移碼突變.會產生一個與野生蛋白相比少了一段中間序列的新蛋白.如果一個外顯子的鹼基數目是3N+1或3N+2,敲除這個外顯子之後會產生移碼突變,就可以達到基因敲除的目的.篩選要敲除(Floxed)的外顯子的時候,一般是從最上游的外顯子開始篩選適合敲除的外顯子.需要注意的是,一般的dna分析軟體不能確定內含子和外顯子的邊界,需要仔細核對.95%以上的邊界遵循gt/ag邊界原則.也可以在Ensembl上查一個基因的外顯子和內含子.這個網站上的結果絕大部分是正確的.但也需要仔細核對.畢竟基因敲除小鼠研發是一個時間比較長的過程,需要特別小心.前期做多少的考慮都不嫌多.這些原則只是對一般課題的考慮.特殊情況需要特殊處理.

4、嵌合體小鼠的免疫系統問題

A和B都不會相互排斥， 由於在胚胎期間免疫系統發生了一種稱為免疫耐受的機制，對對方的MHC抗原發生了耐受，所以雙方的免疫系統對另一方的抗原處於默認「放行」的狀態；器官移植時候，沒有這種免疫耐受的機制，只能通過化學葯物進行抑制免疫系統的方法減緩排異反應。具體可以百度「免疫耐受」、「MHC」、「HLA」等抗原。謝謝！

5、如何高效制備生殖系傳遞的嵌合體小鼠

嵌合體是指動物的兩顆受精卵融合在一起成為一個個體並成長。遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體，亦指染色體異常類型之一。轉基因小鼠制備過程中必須要經歷的一個過程，所以基因敲除小鼠必須要用到嵌合體小鼠。A和B都不會相互排斥,由於在胚胎期間免疫系統發生了一種稱為免疫耐受的機制,對對方的MHC抗原發生了耐受,所以雙方的免疫系統對另一方的抗原處於默認「放行」的狀態；器官移植時候,沒有這種免疫耐受的機制,只能通過化學葯物進行抑制免疫系統的方法減緩排異反應.具體可以百度「免疫耐受」、「MHC」、「HLA」等抗原.

6、求助有無條件性T細胞敲除的小鼠

小鼠和大鼠可謂是生命科學實驗室里的明星,成功的小鼠和大鼠模型可謂是生命科學的好幫手.很多人可能想自己設計或是了解條件性基因敲除小鼠,在此做個小結,供大家參考.
條件性基因敲除小鼠的設計利用了Cre/LoxP或Flipe/Frt原理.它們都是位點特異性重組酶系統.這里以Cre/LoxP系統為例.比如在待敲除的一段目標DNA序列的兩端各放置一個loxP序列,得到flox(flanked by loxP)小鼠.將flox小鼠與帶有細胞特異性表達Cre的小鼠交配繁殖,以獲得在特定細胞里把目標基因敲除掉的小鼠,即條件性基因敲除小鼠.此外,若與控制Cre表達的其他誘導系統(比如CreERT2)相結合,還可以對某一基因同時實現時空兩方面的調控.
Cre/loxP系統來源於噬菌體,可以介導位點特異的DNA重組.該系統含有兩個組成成分：一個是一段長34bp的DNA序列(LoxP序列),含有兩個13 bp的反向重復序列和一個8 bp的核心序列.LoxP的方向由中間這8個鹼基決定.這段LoxP序列是Cre重組酶識別的位點.令一個組成部分是Cre重組酶.它是由噬菌體編碼的一種由343個氨基酸組成的蛋白.Cre可以介導兩個LoxP位點的重組,從而引起兩個LoxP之間DNA序列的缺失.如果將Cre重組酶cDNA通過基因工程的手段置於組織或細胞特異性啟動子之下,可以得到Cre組織/細胞特異性表達的Cre小鼠,也叫Cre工具小鼠.跟Flox小鼠交配之後,可以得到條件性基因敲除小鼠.
所謂Flox小鼠是指在某個基因的某個外顯子兩側各放一個LoxP序列.這段序列就是Flanked by LoxP,也就叫做Flox小鼠.這種Flox小鼠一般要通過設計構建打靶載體、胚胎幹細胞重組、囊胚顯微注射、和嵌合體小鼠傳代來獲得.這種小鼠跟Cre工具小鼠交配,由於Cre的表達,介導兩個LoxP位點序列的重組,從而敲除兩個LoxP之間的序列.由於不同Cre工具小鼠的Cre表達有組織/細胞特異性,就可以達到在不同組織、細胞里特異性敲除目的基因的目標.比如上皮細胞、胸腺細胞、T細胞、B細胞、心肌細胞、腸道、肺臟等.

7、為何基因敲除需要用到嵌合體小鼠

嵌合體是指動物的兩顆受精卵融合在一起成為一個個體並成長。遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體，亦指染色體異常類型之一。轉基因小鼠制備過程中必須要經歷的一個過程，所以基因敲除小鼠必須要用到嵌合體小鼠。

8、如何採用細胞融合方法紙杯黑白相間的嵌合體小鼠,如何鑒定

上帝啊 快來拯救這孩子吧

9、什麼是嵌合體？它的發生機理是什麼

遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體，亦指染色體異常類型之一。有時也有同一器官出現不同性狀的生物體的意思。出現該病狀的人員往往伴隨精力極度旺盛,有時出現多重人格的精神錯亂症狀。臨床還出現偶爾患者血型變換的症狀。

通常發生在合子形成後的卵裂或胚胎進入正常發育早期，在胚胎發育的不同階段如果發生了突變，可以產生全身性或組織部分性嵌合體。

通常發生在合子形成後的卵裂或胚胎進入正常發育早期，在胚胎發育的不同階段如果發生了突變，可以產生全身性或組織部分性嵌合體。

(9)骨髓嵌合體小鼠擴展資料

應用

嵌合體在果樹園藝中有很高的經濟價值。例如日本土橋紅蜜柑是扇形嵌合體，在紅色果皮上鑲嵌有艷麗的黃色條紋。許多名貴的花卉也是嵌合體。嵌合體一般不能通過有性生殖保種，但可以採用組織培養方法保種和繁殖。果蠅的雌雄嵌合體及異表型小鼠是行為遺傳學和發生遺傳學研究的材料。

動物中的嵌合現象和表現形式常不同於植物。例如果蠅的雌雄嵌合體比較典型，它可以是身體的左半部為一種性別，右半部為另一種性別，或身體的前半部和後半部由兩種不同性別的細胞分別組成。也可能是身體較多或較少的一部分為一種性別，其餘部分為另一種性別等多種表現形式。由抗原不同的細胞所組成的嵌合體，則僅存在於哺乳動物中。

10、嵌合體幼鼠為什麼是二倍體不是四倍體，圖中只形成一個囊胚和一個小鼠嗎？

圖中確實只有一個囊胚和一個小鼠。

但所謂嵌合體，是2個受精卵因不明原因粘在一起發育，並發育成囊胚以及後續完整胚胎的過程。

在這個過程中，2個受精卵幾乎僅僅是物理上粘在一起而已。沒有發生細胞融合這個級別的活動。所以嵌合體的個體，所有體細胞都是2倍體，只不過不同器官可能可以得到基因型表現型完全不一樣的細胞。