骨髓間充質幹細胞分離

1、骨髓間充質幹細胞分離的方法有幾種

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2、間充質幹細胞和造血幹細胞如果只能存一個，選哪種？

幹細胞是一類具有自我復制和分化能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞。人體內所有的組織和器官都是由幹細胞分化而來，任何組織器官出現了損傷，幾乎都可以用幹細胞來進行修復,隨著對幹細胞研究的深入，對許多傳統治療手段無效的疾病提供了新途徑。

目前市面上常見的存儲類型有：臍帶間充質幹細胞、胎盤間充質幹細胞、臍帶血造血幹細胞、牙髓幹細胞、脂肪間充質幹細胞等。

1臍帶間充質幹細胞

臍帶間充質幹細胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）來源於新生兒臍帶組織中，它能分化成許多種組織細胞，是一種多功能幹細胞。

在骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、內皮和心肌等組織工程方面的臨床應用前景廣闊。

2胎盤間充質幹細胞

胎盤間充質幹細胞（mesenchymal stem cell，MSC）在胚胎發育中來源於中胚層，易於分離擴增，體外倍增能力旺盛，即使擴增1億倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修復種子細胞。

可以用來修復受損或病變的組織器官，治療心、腦血管疾病、神經系統疾病、肝臟疾病、骨組織病、角膜損傷、燒傷燙傷等多種疾病。

在臍帶和胎盤中提取MSC有以下優勢：

01是醫療廢棄物，屬於胎兒附屬物，對母嬰無害，採集之前會對產婦進行健康檢查並簽署知情同意書，因此不受倫理限制；

02提取的細胞相對純凈且數量充足；

03細胞免疫原性低、無致瘤性，不會隨著傳代次數增加以及機體年齡增長導致增殖能力和分化能力降低；

04較為原始的幹細胞，具有極強的可塑性和較強的擴增能力。

3臍帶血造血幹細胞

臍帶血（Cord blood）是胎兒娩出後，常規臍帶結扎並離斷後殘留在臍帶和胎盤中的血液，一般小於100ml，通常廢棄。

臍帶血中有可以重建人體造血和免疫系統的造血幹細胞，用於輔助治療白血病、再生障礙性貧血等血液系統疾病。臍帶血作為人類生物資源儲存已得廣泛認可，但是它的應用受限於有限的血液量，使用時需要配型。

4牙髓幹細胞

牙髓幹細胞是具有多能分化和自我更新能力的間充質幹細胞，最早從恆牙牙髓中分離出來，來自孩子脫落的乳牙也可以分離出牙髓幹細胞。

牙髓幹細胞，具有自我更新和多向分化的能力，且易於獲得、可通過無創性常規臨床操作分離，與典型的骨髓間充質幹細胞相比，無論是再生潛能還是增殖能力均較高。但其細胞量很少，應用暫時不是很廣泛。

3、骨髓間充質幹細胞分離的方法有幾種

目前常用的分離MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法，全骨髓法即根據幹細胞在低血清培養基中有貼壁優勢特性，定期換液除去不貼壁細胞，從而達到純化及擴增MSC的目的。密度梯度離心法即根據骨髓中各細胞成分比重的不同，分離單核細胞進行貼壁培養。二者本質上無多大區別。隨著對MSC表面抗原認識的深入，又有人利用免疫方法如流式細胞儀法、免疫磁珠法等對其進行分離純化。但經過流式或磁珠分選後的細胞出現了增殖緩慢等一些問題，加之成本較高和技術的難度，在某種程度上限制了這些方法的廣泛應用。

4、骨髓間充質幹細胞表面標志物cd45是單標還是雙標

不同的幹細胞有自己特異的細胞表面抗原，鑒定細胞的種類最准確直接的方法就是用流式細胞儀檢測其表面抗原。
以骨髓間充質幹細胞（MSC）為例，需要鑒定CD34、CD44、SH1等表面標志。除此之外，骨髓間充質幹細胞還需要進行分化實驗，以回證實其可以分化為骨、軟骨、細胞。以上兩條，即表面標志及分化實驗沒有問題，就可以確定培養的細胞為骨髓間充質幹細胞。
不同的幹細胞有不答同的表面標志及分化能力，所以MSC只是做為一個例子來說明。

5、間充質幹細胞的主要特性

間充質幹細胞(MSCs)是屬於中胚層的一類多能幹細胞，主要存在於結締組織和器官間質中，以骨髓組織中含量最為豐富，由於骨髓是其主要來源，因此統稱為骨髓間充質幹細胞。骨髓間充質幹細胞具有以下特性：
一、具有強大的增殖能力和多向分化潛能，在適宜的體內或體外環境下具有分化為肌細胞、肝細胞、成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、基質細胞等多種細胞的能力。
二、具有免疫調節功能，通過細胞間的相互作用及產生細胞因子抑制T細胞的增殖及其免疫反應 ，從而發揮免疫重建的功能。
三、具有來源方便，易於分離、培養、擴增和純化，多次傳代擴增後仍具有幹細胞特性，不存在免疫排斥的特性。
四、面目模糊，表面抗原不明顯，異體移植排異較輕，配型要求不嚴格。
正是由於間充質幹細胞所具備的這些免疫學特性，使其在血液病治療方面具有廣闊的臨床應用前景。通過自體移植可以重建組織器官的結構和功能，並且可避免免疫排斥反應。

6、骨髓巨噬細胞和間充質幹細胞的關系

單核細胞來源粒--單系祖細胞，經原單核細胞、幼稚單細胞階段分化成單核細胞，然後由骨髓釋放入血，在血中3~~4天後進入組織和漿膜腔轉變成巨噬細胞。二者是相同但在部位不同名稱不一樣，共同構成單核巨噬細胞系統。 單核-巨噬細胞系統包括血液中
巨噬細胞\幹細胞\骨髓
單核細胞來源粒--單系祖細胞，經原單核細胞、幼稚單細胞階段分化成單核細胞，然後由骨髓釋放入血，在血中3~~4天後進入組織和漿膜腔轉變成巨噬細胞。二者是相同但在部位不同名稱不一樣，共同構成單核巨噬細胞系統。 單核-巨噬細胞系統包括血液中

7、間充質幹細胞移植都有哪些方式

間充質幹細胞移植，指的是將間充質幹細胞從自身採集，然後進行培養、純化，再回輸進患者體內用以治療硬皮病、皮肌炎、紅斑狼瘡、類風濕、運動神經元病等免疫性疾病的一種最前沿的治療方法。間充質幹細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為腎、脂肪、骨、軟骨、肌肉、內皮等多種組織細胞，連續傳代培養和冷凍保存後仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用於病變引起的組織器官損傷修復。
諾萊醫學臨床提示間充質幹細胞的移植分為以下四個部分
第一步：對患者的整體狀況進行評估，如果沒有禁忌症如：感染、腎危象、心包大量積液等的情況下，進行細胞動員4－5天。
第二步：MSCs的採集（骨髓、臍帶、脂肪和羊膜）
第三步：MSCs的分離、培養及擴增,大約20天左右
第四步：MSCs的移植:
1.靜脈注射
2013年5月-2014 年4月，朱寧等人在診治18例系統性紅斑狼瘡患者時，用分離培養後的間充質幹細胞採用幹細胞移植技術進行治療。該幹細胞移植治療就是採用靜脈輸注的方式，移植方法如下：患者取仰卧位，首先取肘前部較粗血管，利用生理鹽水建立靜脈通道，然後將已復溫好的裝有間充質幹細胞的幹細胞袋接入靜脈通道內，覆蓋無菌紗布於穿刺部位，並注意控制滴速，一般幹細胞懸液 30 ml於 2 小時內滴完，最後滴入生理鹽水100 ml 以沖洗管道。為入選患者均完成1個療程的治療。結果證明應間充質移植治療系統性紅斑狼瘡療效肯定，且較為安全。
2.動脈注射
幹細胞移植治療糖尿病，是糖尿病治療新療法中的熱門療法，隆敏等人曾經用間充質幹細胞移植方法治療一位39歲的Ⅰ型糖尿病女性患者。移植過程為：患者進入手術室，尋找到供應胰腺的胰背動脈後，將間充質幹細胞緩慢均勻注射入胰背動脈。結果該患者術後3個月內胰島素劑量大幅度減少了58.54％，有望完全停用胰島素。
3.多點混合移植
幹細胞移植治療糖尿病足的療效被廣泛認可，在眾多臨床案例中，部分研究採用混合移植的方式以求使幹細胞在體內發揮的功效更加全面化。虞朝黎等人用間充質幹細胞移植治療17例缺血性糖尿病足患者，移植方法就是採用多點混合注射的方法，具體過程為：抽取間充質幹細胞後分離，配成細胞混懸液；在手術室硬膜外麻醉後，無菌條件下，將幹細胞懸液按3×75px間距進行肌肉注射，病變嚴重的按1×25px間距注射；肌肉注射的同時進行股動脈穿刺，放置導管，將部分幹細胞懸液注入股動脈。
4.病灶部位注射
2007年至2011年王玉龍等人採用間充質幹細胞移植治療脛骨骨折骨不連患者11例，結果患者經間充質幹細胞移植治療脛骨骨折骨不連，在4-27個月，平均13個月中，X線片顯示骨折癒合良好，療效滿意，有臨床應用價值。移植方法為：在手術室X 線透視定位下，用14號骨穿針准確刺入脛骨骨不連部位,完全注入間充質幹細胞懸浮液。此外，在應用間充質幹細胞治療小兒腦癱的研究中，很多研究者也會選擇患兒腦內移植、腰椎穿刺等與疾病相關的功能組織位點進行移植。
諾萊醫學溫馨提示：
①MSC在組織中的含量（細胞豐度）：臍帶的含量毫無疑問為最高，羊膜和脂肪次之；而臍帶血中含量極少，導致檢測不到之事常用發生；
②MSC增殖能力：優於MSC具有年齡特性，臍帶和羊膜來源的MSC具有明顯的優勢，脂肪和骨髓次之；
③免疫調節能力：臍帶、羊膜和脂肪來源的MSC優於骨髓MSC，而胎盤MSC的免疫調節能力最差；
④分泌細胞因子譜：臍帶MSC分泌細胞生長因子的總量明顯高於骨髓MSC，但是不同來源的分泌細胞因子譜有明顯的特點；
⑤由於具有來源獲取方便和高增殖能力等特性，能培養獲得大量的MSC細胞數足夠滿足臨床治療需要，使得臍帶、羊膜和脂肪最適合作為MSC細胞治療的組織來源。但是我們也必須認識到，不同的實驗室、不同的分離方法及不同的培養體系，均可導致MSC的實驗研究結果出現不一致性，如下圖所示；即使是相同的來源，不同個體之間的間充質幹細胞也出現功能上的異質性。
因此，我們必須對目前的研究結果和結論保持一定的謹慎態度，不排除將來的某天培養技術的突破，可以抵消組織來源的差異所導致的MSC功能的差異。