1、免疫組化鑒定骨髓間充質幹細胞買什麼試劑盒
單靠免疫組化的方法是不能定量,定性的。
Bone Mesenchymal Stem Cells 作為一個細胞群體,還沒有發現有特定細胞表面marker. 對於那些可以代表自我更新和分化的marker, 也不清楚到底要發現哪一個的表達才能確定該細胞就是BMSC。
目前常用的方法,就是採用培養,colony-forming unit-fibroblasts (CFU-F)這個方法。一般BMSC可以24-48小時貼壁。
流式細胞計數,比如STRO-1,但是一般認為STRO-1陽性的細胞更趨向於造血幹細胞,和BMSC簡單區別還不是很清楚。
這里有個培養分化的產品
http://www.rndsystems.com/pdf/SC020.pdf
2、骨髓的基因組提取可以用提取血液基因組的試劑盒嗎
這個好像不可以,因為它們的成分不同,你需要查一下相關的資料的。具體的步驟可以參考下面的:1.根據白細胞計數(個體每個細胞約含6pg基因組DNA,要獲得30L gDNA 約需5×106個白細胞):取外周血5~30ml或骨髓1~6ml,加入0.1體積的2%EDTA, pH7.4,混勻。 2.抗凝血和骨髓於1500r/min離心10分鍾,去上層血漿。 3.加入2倍體積的紅細胞裂解液, 顛倒離心管使其混勻,於1500r/min 離心10分鍾,棄去含Hb的上清,再加入5~10ml 紅細胞裂解液, 同樣混勻、離心、棄上清。 4.加入10ml PBS重懸白細胞沉澱,於1500r/min離心10分鍾。棄上清。 5.加入2ml TES溶液重懸白細胞沉澱。 6.吸取白細胞液加入6ml DNA提取緩沖液中,邊加邊混勻。 7.加入蛋白酶K至終濃度為100~200mg/L,於37℃消化過夜或45~55℃消化3~4小時,其間振搖幾次。 8.加入等體積飽和酚抽提,來回顛倒離心管並適當振搖以使其混勻,如太粘稠可追加適量TES溶液,於3500r/min離心10分鍾, 吸取含DNA的水相至另一離心管。 9.加入等體積酚/氯仿/異戊醇(25∶24∶1) ,同上混勻,於2500r/min離心5~10分鍾,余同上一步驟,可重復1~3次。10.加入等體積氯仿/異戊醇,混勻,2500r/min 離心5分鍾, 吸取水相DNA至小燒杯中;加入0.2體積的10mol/L醋酸銨, 混勻;加入2倍體積無水乙醇,混勻;DNA自然沉澱出來,倒去液體。 11.加入10~20ml 70%乙醇洗DNA, 重復1~2次,每次均倒去液體,讓DNA小塊於室溫乾燥, 但不可過度乾燥,以防其難於溶解。 12.加入1~10ml TE, pH8.0, 於室溫或55℃水浴溶解DNA;再加入0.5體積7.5mmol/L醋酸銨, pH7.5,混勻;加入2倍體積無水乙醇, 混勻;沉澱DNA後倒去液體, 同樣用70%乙醇洗DNA 2~3次, 再使DNA小塊乾燥。 13.用適量TE,pH8.0, 溶解DNA, 濃度以0.4~0.6g/L (ug/uL)為宜,於4℃保存。
3、哪個品牌轉染試劑可以轉染BMDMs細胞(小鼠骨髓來源的巨噬細胞)?
已經發表文章轉染BMDMs細胞(小鼠骨髓來源的巨噬細胞文章如下:
清華大學免疫學研究所發表文章
清華大學用invigentech產品
清華大學
清華大學免疫學研究所