1、骨髓細胞分選
可以利用流式細胞儀分選,只做過普通流式,沒做過分選。
2、各位大俠,naive T 細胞的分離
GVHD是同種異體造血幹細胞移植(allo-HSCT)後影響預後的 重要並發症。受者預處理造成組織損傷並釋放炎性因子(如IFN-γ、IL-2等)引 起GVHD。最近的研究發現骨髓來源的間充質幹細胞(MSCs)不僅可以分化為 多種間充質組織,而且具有支持造血和免疫調節作用,但其機制尚不清楚。目前 的研究認為供者來源的Naive T細胞識別受者主要組織相容性抗原啟動了 GVHD。我們將體外新生的Naive T細胞接種於異基因MSCs上,觀察MSCs對 Naive T細胞分泌細胞因子的影響,直接研究它對Naive T細胞的作用,將更深入 地揭示其預防GVHD的機制。 材料和方法:
1、 MSCs體外分離培養:將肝素抗凝的骨髓用密度梯度離心 法(過percoll細胞分離液)分離出單個核細胞,體外培養貼壁細胞,傳3代後得 到純度和數量均較高的MSCs,經60Co照射後作為實驗細胞。
2、 臍血CD34+細 胞體外分化為Naive T細胞:將胎兒胸腺組織貼壁培養建立胸腺基質細胞培養 (TSC)體系;用單克隆抗體-磁珠分離系統分離純化臍血CD34+細胞;將CD34+ 細胞植入TSC並添加IL-12、 FL、IL-2,共孵育5周後獲取Naive T細胞並通過 流式細胞術鑒定其表型。
3、 MSCs與Naive T細胞共孵育:將體外培養獲取的 Naive T細胞種入經照射近融合的MSCs中,對照組為單獨MSCs培養和單獨Naive T細胞培養。孵育7天後,取上清用ELISA定量檢測IL-2、 IFN-γ、IL-4和IL-10, 並應用流式細胞儀檢測共孵育前後T淋巴細胞表型變化 結果:1、 人骨髓來源的MSCs可以在體外培養擴增,用流式細胞術分析傳3 代以後的細胞發現它們具有共同的表型CD166+,CD105+, CD45-和CD34-,2、 CD34+細胞可在TSC體系中分化出Naive T細胞,隨著培養時間的延長,與體內 胸腺生成T細胞類似,依次出現CD4/8雙陰性,雙陽性,單陽性細胞。培養第5 周細胞表型測定:CD4+65. 2%,CD8+52. 7%,CD3+78. 8%,CD45RA表達88. 9%。3、 中文摘要 MSCS與NaiveT細胞共孵育七天,鏡下觀察可見共孵育組T細胞數量輕度增加, 流式細胞儀檢測共孵育前後T淋巴細胞表型顯示CDS+細胞相對增加。ELISA檢 測上清發現共孵育組IFN一Y分泌減少(p0 .05),IL一2分泌增加(p0.05)。另 外,在實驗組和對照組中均未檢測到IL一4、IL一10。 結論:MSCs具有一定的異基因反應性,能刺激NaiveT細胞增生,且MSCs 和NaiveT細胞共孵育組上清中的IL一2分泌增加而IFN一Y分泌減少,提示MSCs 可能借CDS+調節T細胞增生抑制異基因反應性T細胞分泌IFN一Y來發揮免疫調 節作用,本文結果將為進一步闡明MSCs免疫調節機制提供新的線索。
3、骨髓間充質幹細胞分離的方法有幾種
目前常用的分離MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法,全骨髓法即根據幹細胞在低血清培養基中有貼壁優勢特性,定期換液除去不貼壁細胞,從而達到純化及擴增MSC的目的。密度梯度離心法即根據骨髓中各細胞成分比重的不同,分離單核細胞進行貼壁培養。二者本質上無多大區別。隨著對MSC表面抗原認識的深入,又有人利用免疫方法如流式細胞儀法、免疫磁珠法等對其進行分離純化。但經過流式或磁珠分選後的細胞出現了增殖緩慢等一些問題,加之成本較高和技術的難度,在某種程度上限制了這些方法的廣泛應用。
4、血細胞分化簇抗原(CD)34陽性造血幹細胞分選的意思是什麼
這指的應該是用流式細胞儀,對凍存的骨髓或臍帶血(臍帶血幾率大一些,含量0.1%-1%)進行檢測的一種方法或手段,如分離出一批符合標準的CD34造血幹細胞,或以此為設定此類細胞的標准。
5、細胞磁珠分選的 MACS Cell Separation Columns 可以重復使用嗎
最好不要重復用。本來就是一次性的東西。
理論上來說,反復沖洗後柱子可以恢復原樣,但是之前過濾的東西可能有些物質物理吸附在柱子上。之前分選中吸附柱子的雜質,是否會影響重復使用,不好說;分選效率也不好說。
之前我曾經用這個重復分過骨髓,還是能夠分離出目的細胞,但是分離效率什麼的沒具體測過,沒把握。
6、骨髓幹細胞的分離
骨髓抽取及骨髓幹細胞的分離純化:患者在無菌條件下從髂後上棘進行穿刺,分不同部位抽取骨髓l0~20 mL,置於肝素化的無菌離心管中,骨髓離心取出脂肪層
7、骨髓單個核細胞分離,目的用於RNA的提取
用淋巴細胞分離液就可以了。天津生產的,90元一瓶,200毫升。
1 骨髓液3毫升,用3毫升PBS稀釋混勻;
2 平鋪於6毫升淋巴細胞分離液液面上,保持界面清晰;
3 2000轉/分水平離心30分鍾;
4 1毫升針頭吸取中間雲霧層;
5 用PBS洗滌兩次。
骨髓液用抗凝管收集就可以了,不要放到4度冰箱,避免溶血;淋巴細胞分離液使用前室溫平衡;離心機必須為水平離心,不要突然剎車,應使速度緩慢下降;骨髓液和淋巴細胞分離液必須保持界面清晰。
8、人的骨髓細胞進行流式分選,骨髓細胞如何取樣,保存,運輸
用無土栽培技術,不加入含以上元素的培養基,然後看到植物的生長出現問題,則說明植物的生長需要改簽元素
9、如何從小鼠骨髓中分離和培養DC
拉頸處死小鼠,無菌剝離股骨和脛骨,用Hank』S沖出骨髓細胞,PBS洗
滌1次,用0.83%Tris—NH4CL裂解紅細胞,RPMI1640培養液洗滌2次,調整細胞濃度為1×106個/mL,
並加入rmGM—CSF(1000 U/mL)和rmlL-4(500 U/mL),接種於24孔培養板,置於37~C,5%CO2孵箱中
培養.第3天輕輕搖動培養板,吸走大部分懸浮細胞,加人等量的培養液,並補足細胞因子.隔日半量換液
1次,第7天收集懸浮或稍微貼壁的細胞.
10、細胞分選儀與細胞分析儀相同嗎?不同的話有什麼區別啊 ??把答案發到706953761@163.com...謝了,定有高分
兩者是有區別的:
細胞分選儀是用於細胞分選的醫學設備,可將移植物中的腫瘤細胞和異常的免疫細胞分選去除,達到有效治療難治性自身免疫性疾病、惡性淋巴瘤、多發性骨髓瘤、某些惡性實體腫瘤骨髓侵犯等疾病之目的。
而細胞分析儀是採用了多角度偏振光散射技術進行白細胞分類計數.其原理是利用鞘流液與血標本按適當的比例混合後,使其白細胞內部結構基本保持不變(只有鹼性粒細胞顆粒因有吸濕特性而其結構有較微改變),紅細胞在該鞘流液中細胞膜完整且和鞘流液的吸光指數相等,故不會干擾白細胞的檢測.用偏振激光束射照單個排列細胞(集中於一直徑30um的小股液流中),並進一步分辨細胞.該技術採用了其他儀器很少用的10°窄角和偏振加消偏振檢測法,分辨能力有所提高.它第一步先測試中性/單核細胞,用0°-90°的散射數據,再測90°D的衍射差,將嗜酸性和中性細胞分開,而嗜鹼性粒細胞,淋巴細胞及單核細胞,則按其大小和內部結構的復雜性不同,所產生的散射光也各異,用可調較的門限加以區分.其採用特定程序自動儲存分析數據,並經電腦軟體處理,在屏幕上顯示6個散點圖和兩個直方圖.