1、嵌合體形成的原因
卵裂過程中發生染色體的不分離或丟失以及結構畸變就會造成嵌合體產生。
嵌合體
遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體,亦指染色體異常類型之一。有時也有同一器官出現不同性狀的生物體的意思。出現該病狀的人員往往伴隨精力極度旺盛,有時出現多重人格的精神錯亂症狀。目前臨床還出現偶爾患者血型變換的症狀。
2、嵌合體幼鼠為什麼是二倍體不是四倍體,圖中只形成一個囊胚和一個小鼠嗎?
圖中確實只有一個囊胚和一個小鼠。
但所謂嵌合體,是2個受精卵因不明原因粘在一起發育,並發育成囊胚以及後續完整胚胎的過程。
在這個過程中,2個受精卵幾乎僅僅是物理上粘在一起而已。沒有發生細胞融合這個級別的活動。所以嵌合體的個體,所有體細胞都是2倍體,只不過不同器官可能可以得到基因型表現型完全不一樣的細胞。
3、neo 在小鼠基因型鑒定中起什麼作用
neo 在小鼠基因型鑒定中起什麼作用
基因敲除小鼠已經成為現代生命科學基礎研究和葯物研發領域不可或缺的實驗動物模型,在生命科學、人類醫葯和健康研究領域中發揮著重要的作用。基於胚胎幹細胞的基因打靶技術、EGE技術(基於Crispr cas9技術)是當下比較火熱的基因敲除小鼠制備技術。利用這兩種技術制備基因敲除小鼠的流程是什麼樣的?
一、 基於胚胎幹細胞的基因打靶技術制備基因敲除小鼠的流程:
1. 課題設計,訂購課題BAC菌;
2. 按照課題設計,完成打靶載體設計和構建;
3. 將重組載體電轉到胚胎幹細胞中,用G418篩選轉染後的胚胎幹細胞,得到陽性克隆;
4. 進一步通過PCR和southern blot雜交技術(基因敲除小鼠檢測金標准)對上一步得到的陽性克隆進行篩選,得到穩定整合外源基因的胚胎幹細胞陽性克隆;
5. 將胚胎幹細胞陽性克隆注射到小鼠囊胚中,並植入到假孕小鼠的子宮內;
6. 得到嵌合鼠,並獲得F1陽性雜合子小鼠。
基於胚胎幹細胞的基因打靶技術制備基因敲除小鼠是目前為止唯一一個可以滿足幾乎所有基因組修飾要求的打靶技術,但目前只應用在小鼠的基因敲除上,而且其周期長工作量大。
二、 利用EGE技術(基於Crispr cas9技術)制備基因敲除小鼠的流程
1. 設計構建識別靶序列的sgRNA;
2. 設計構建致靶基因切割的EGE系統載體質粒;
3. 利用百奧賽圖自主開發的UCA試劑盒對sgRNA/Cas9進行活性檢測;
4. 設計構建打靶載體;
5. 體外轉錄sgRNA/Cas9 mRNA;
6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶載體;
7. 獲得Fo代小鼠,利用PCR對Fo代小鼠進行基因型鑒定;
8. 獲得F1代小鼠,利用PCR和southern blot雜交技術(基因敲除小鼠檢測金標准)對F1代小鼠進行基因型鑒定。
雖然EGE技術(基於Crispr cas9技術)制備基因敲除小鼠看似比基於胚胎幹細胞的基因打靶技術制備基因敲除小鼠流程繁瑣,其實不然,EGE技術(基於Crispr cas9技術)系統構建簡單,基因敲除/敲入效率高,速度快,可實現多基因、多物種基因敲除/敲入,最快2個月即可得到F0代陽性鼠,5個月得到F1F1代雜合子小鼠。
4、由小鼠骨髓瘤細胞與一B細胞融合後形成的細胞克隆所產生的抗體稱為
答案是A,這應該毫無疑問吧。
教材上對單克隆抗體應該有比較詳盡的介紹,我來說說B、C、D選項。
多克隆抗體:天然抗原分子中通常含有多個不同的抗原表位,那麼該抗原刺激機體後,多個B細胞克隆被激活,從而產生的抗體中實際上含有針對該抗原各個表位的免疫球蛋白,稱為多克隆抗體。多克隆抗體獲得的途徑有:動物免疫血清、恢復期病人血清或者免疫接種人群。
單鏈抗體:單鏈抗體是利用基因工程技術在大腸桿菌中表達的人工合成抗體,只有完整抗體的一條鏈,因此得名為單鏈抗體。它是由抗體重鏈可變區和輕鏈可變區通過15~20個氨基酸的短肽連接而成。
嵌合抗體:以人-鼠嵌合抗體為例,它是一種通過基因工程技術制備的抗體,由鼠源性抗體的V 區基因與人抗體的C 區基因拼接為嵌合基因,然後插入載體,轉染骨髓瘤組織表達的抗體分子。
5、j558l小鼠骨髓瘤細胞能用於轉染嗎
通過人鼠嵌合抗體重鏈基因轉染小鼠骨髓瘤J558L的研究,較詳盡地闡述了用原生質體融合法將重組的人鼠嵌合抗體重鏈基因轉染到S558L骨髓瘤細胞中,並用ELISA法檢測轉染子的過程和方法。同時簡要地說明了影響轉染率的一些因素。
【作者單位】: 黑龍江省科學院應用微生物研究所 黑龍江省科學院應用微生物研究所 黑龍江省科學院應用微生物研究所 黑龍江省科學院應用微生物研究所 黑龍江省科學院應用微生物研究所 黑龍江省科學院應用微生物研究所
【關鍵詞】: 人鼠嵌合抗體 轉染、骨髓瘤JL
【基金】:國家自然科學基金
向哺乳動物細胞轉移外源的DNA,已經成為研究真核細胞基因表達的一種有效途徑。轉移基因的方法國外已有許多報道,如磷酸鈣沉澱轉移技術ts1、DEAE一葡聚糖技術閉、顯微注射技術田等。其中應用最為廣泛的是磷酸鈣沉澱法,它具有簡單、快速的優點。但若以骨髓瘤細胞作為受體時,其
6、骨髓移植後做了個嵌合體有99,26%這個數好嗎?
從原理上來說100%供者植入是最好的。但是因為檢驗方法的問題,一般在98%以上,且多次檢查沒有波動,都可視作100%植入。
如果是再障做的骨髓移植,只要造血功能正常,供受者各佔一部分的嵌合體也可以接受。
7、嵌合體小鼠的免疫系統問題
A和B都不會相互排斥, 由於在胚胎期間免疫系統發生了一種稱為免疫耐受的機制,對對方的MHC抗原發生了耐受,所以雙方的免疫系統對另一方的抗原處於默認「放行」的狀態;器官移植時候,沒有這種免疫耐受的機制,只能通過化學葯物進行抑制免疫系統的方法減緩排異反應。具體可以百度「免疫耐受」、「MHC」、「HLA」等抗原。謝謝!
8、已有基因剔除嵌合小鼠,由於嵌合小鼠的一部分生殖細胞是來源於ES細胞,如何獲得純合子基因剔除小鼠?
不理解你的意思。。。 繁殖幾代不就純和了嘛。。。 Floxp和CRE別在一個染色體上,不連鎖就行了唄。。。
9、如何高效制備生殖系傳遞的嵌合體小鼠
嵌合體是指動物的兩顆受精卵融合在一起成為一個個體並成長。遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體,亦指染色體異常類型之一。轉基因小鼠制備過程中必須要經歷的一個過程,所以基因敲除小鼠必須要用到嵌合體小鼠。A和B都不會相互排斥,由於在胚胎期間免疫系統發生了一種稱為免疫耐受的機制,對對方的MHC抗原發生了耐受,所以雙方的免疫系統對另一方的抗原處於默認「放行」的狀態;器官移植時候,沒有這種免疫耐受的機制,只能通過化學葯物進行抑制免疫系統的方法減緩排異反應.具體可以百度「免疫耐受」、「MHC」、「HLA」等抗原.
10、為何基因敲除需要用到嵌合體小鼠
嵌合體是指動物的兩顆受精卵融合在一起成為一個個體並成長。遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體,亦指染色體異常類型之一。轉基因小鼠制備過程中必須要經歷的一個過程,所以基因敲除小鼠必須要用到嵌合體小鼠。