1、如何提取小鼠骨髓細胞?
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.
2、請問一隻小鼠有多少骨髓單個核細胞?
單核細胞(monocytes)是體積最大的白細胞.其細胞核常偏位,呈多形性,如卵圓形、腎形、馬蹄形、不規則形等,常有折疊感;染色質呈疏鬆網狀,著色較淺.胞質較多,嗜鹼性,但因含大量細小的嗜天青顆粒而染成灰藍色,顆粒含過氧化物酶.血塗片,Giemsa染色 .
單個核細胞是指只有一個細胞核的細胞.一般醫學檢驗書上說的是「外周血中單個核的白細胞」包括「淋巴細胞和單核細胞」.外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear
cell,PBMC)即外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞.體外檢測淋巴細胞首先要分離外周血單個核細胞,目前主要的分離方法是
Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度離心法,因為血液中各有形成分的比重存在差異,因此得以分離.紅細胞和
粒細胞密度大於分層液,同時因紅細胞遇到Ficoll而凝集成串錢狀而沉積於管底.血小板則因密度小而懸浮於血漿中,唯有與分層液密度相當的單個核細胞密
集在血漿層和分層液的界面中,呈白膜狀,吸取該層細胞遞經洗滌高心重懸.本法分離單個核細胞純度可達95%,淋巴細胞約佔90%~95%,細胞獲得率可達
80%以上,其高低與室溫有關,超過25℃時會影響細胞獲得率.
3、小鼠骨髓來源樹突狀細胞 用多大的小鼠
小鼠骨髓來源樹突狀細胞,取小鼠股骨脛骨,小鼠要年輕,可以是6周到8周齡大小的小鼠。性別方面公母不限。經典版本說公的好,公的骨頭大。
所以小鼠骨髓來源樹突狀細胞最好用六周齡到八周齡的小鼠
4、由小鼠骨髓瘤細胞與一B細胞融合後形成的細胞克隆所產生的抗體稱為
答案是A,這應該毫無疑問吧。
教材上對單克隆抗體應該有比較詳盡的介紹,我來說說B、C、D選項。
多克隆抗體:天然抗原分子中通常含有多個不同的抗原表位,那麼該抗原刺激機體後,多個B細胞克隆被激活,從而產生的抗體中實際上含有針對該抗原各個表位的免疫球蛋白,稱為多克隆抗體。多克隆抗體獲得的途徑有:動物免疫血清、恢復期病人血清或者免疫接種人群。
單鏈抗體:單鏈抗體是利用基因工程技術在大腸桿菌中表達的人工合成抗體,只有完整抗體的一條鏈,因此得名為單鏈抗體。它是由抗體重鏈可變區和輕鏈可變區通過15~20個氨基酸的短肽連接而成。
嵌合抗體:以人-鼠嵌合抗體為例,它是一種通過基因工程技術制備的抗體,由鼠源性抗體的V 區基因與人抗體的C 區基因拼接為嵌合基因,然後插入載體,轉染骨髓瘤組織表達的抗體分子。
5、小鼠骨髓幼稚細胞和lymphocyte的區別
小鼠骨髓幼稚細胞和lymphocyte的區別
成年人的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。
紅骨髓能製造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能製造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。
黃骨髓主要是脂肪組織,當人體貧血時,它可以轉化為紅骨髓。有些葯物如氯黴素及呋喃類,在長期大量使用後,可影響骨髓造血功能,引起再生障礙性貧血.
6、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果
在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:
提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。
在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。
滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。
小鼠骨髓細胞染色體標本製作:
原理:
由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;
試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;
儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;
實驗步驟
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。
3. 葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。
二、步驟
秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。
7、如何取小鼠骨髓細胞
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.
8、小鼠骨髓瘤細胞 是什麼
骨髓瘤細胞是一種癌細胞,他對小鼠造成傷害就是通過不斷增殖造成的。所以最後小鼠會腹水,這時候可以從腹水中提取單克隆抗體。小鼠最終會因為骨髓瘤細胞過度繁殖死亡。就和患癌症一樣,但是小鼠在實驗室中有很多,所以實驗室還用這個辦法制備單克隆抗體。