ELISA法檢測類風濕因子

1、ELISA檢測方法的缺點有哪些

ELISA實驗所有方法的缺點很明顯：
1、重復性不好；
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現假陽性；
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時間。

1、直接法（direct ELISA） 

將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

優勢：操作手續簡略，因無須運用二抗可防止交互反響。

缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費用相對進步。

2.間接法（indirect ELISA） 

此測定辦法與直接法相似，不一樣在於一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

優勢：二抗能夠加強信號，並且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。

缺陷：交互反響發作的機率較高。

3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA） 

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定於固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號後直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯系部位。

優勢：高活絡、高專一性，抗原無須事前純化。

缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體聯系部位。

4.競爭法（competitive ELISA） 

樣本里的抗原（自在抗原）和純化並固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當樣品里的自在抗原越多，就能夠聯系越多的抗體，而固定抗原就只能聯繫到較少的抗體，反之亦然。經清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。

優勢：可適用比擬不純的樣本，並且數據再現性很高。

缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。

2、ELISA檢測方法分哪幾種？

雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鍾。（簡稱洗滌，下同）。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.　加酶標抗體：於各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定後的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4.　加底物液顯色：於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鍾。
5.　終止反應：於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結果判定：可於白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以「+」、「-」號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，於450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml於上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）於反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鍾，洗滌；
6.』最後一遍用DDW洗滌。
其餘步驟同「雙抗體夾心法」的4、5、6。

3、什麼是類風濕因子

類風濕因子是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF主要為IgM類自身抗體，但也有IgG類、IgA類、IgD類和IgE類。

4、ELISA法是定性還是定量檢測方法？如果是定量，那怎麼定量呢？

對你想要的已知蛋白進行定量測定。簡單的說，就是把蛋白量轉換成你能看到的顏色信號，顏色的深淺就代表蛋白的多少，通過酶標儀進行顏色深淺的量化，最後得到數值，根據標准曲線來測定蛋白濃度。

5、elisa法檢測hbsag常用什麼方法

如果指的是ELISA的模式，那麼是雙抗體夾心法常用。

目的探討溫度、孵育時間、振盪對ELISA法檢測HBsAg的影響,以期進一步優化檢測條件。

方法採用HBsAg含量約為1ng/mL的血清標本，在4種不同條件(37℃振盪、37℃不振盪、25℃室溫震盪、25℃室溫不振盪)下的3個不同反應時間(10、20、30min)測定HBsAg，記錄吸光度值。

結果除10min37℃不振盪和25℃不振盪差異無統計學意義(P0.05)外，其餘各組差異都有統計學意義(P0.05)。結論37℃振盪20min為ELISA檢測HBsAg的較佳條件。

(5)ELISA法檢測類風濕因子擴展資料：

ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自於該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。

將樣品或標准品加入孔中並孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，並固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。

6、ELISA定量檢測結果不準確的原因，是做方法學驗證 的，求高人指點！

ELISA存在的問題:
1、由於ELISA所用的抗原大部分還是混合的可溶性抗原，所以對同一微生物寄生蟲或其他物質不同部位的抗原還沒有分開。
2、內源性過氧化酶的普遍存在，如人腦組織中，呼吸道分泌物的炎症細胞中及某些病毒的組織培養中均有內源性過氧化物酶的活力，常不易除去，如果用某些方法除去時，則病毒的抗原性亦受到破壞，對於用ELISA檢測不利。
3、對ELISA法的非特異性評價的資料尚不夠完善，因此，對出現一些非特異性反應的時候，往往不易解釋。
4、固相載體的質量常不統一，主要是原料及制備工藝還不一致，致使不同批號的固相載體有時本底值較高，有時吸附性能很差，影響試驗結果。
5、試劑不統一，現在處於「八仙過海，各顯神通」，標准還不能統一。

血清是最常用的ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種：
1． 內源性物質
有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。
（1）類風濕因子 人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。解決該情況的辦法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體 ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離後再測定。
（5）醫源性誘導的抗鼠Ig (s) 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠Ig (s) ，從而克服由於上述原因造成的假陽性。
（6）交叉反應物質 類地高辛、類AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，也會出現假陽性結果。
（7）標本中其它成分的影響 血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定結果有干擾作用。
2． 外源性物質
外源性物質常常是由於用於ELISA測定的血標本的採集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。
（1）標本溶血 由於各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本採集時必須注意避免溶血。
（2）標本受細菌污染 因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
（3）標本保存不當 在冰箱中保存過久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、甚至造成假陽性；標本放置時間過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標本宜為新鮮採集；如不能立即測定，5天內測定的血清標本可存放於4℃，1周後測定的血清標本應低溫凍存；凍存後融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合後再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振盪。
（4）標本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液採集後1/2~2h開始凝固，18~24h完全凝固。臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；這類情況於次日復查時因血凝已完全，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復查結果變為陰性。為避免上述干擾作用，解決的辦法最好是血液標本採集後必須使其充分凝固後再分離血清，或標本採集時用帶分離膠的采血管或於采血管中加入適當的促凝劑。
（5）標本管中添加物質的影響 抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
綜上所述，對臨床檢驗ELISA測定中出現的假陽性或假陰性結果，在考慮試劑因素和操作因素之外，更多的應從標本因素方面進行分析，並應採取相應措施排除干擾作用，從而為臨床提供正確可靠的檢測結果。

7、類風濕因子的測定

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8、elisa 法檢測HIV為什麼總是出現假陽性

造成ELISA檢測HIV假陽性的原因主要有3個:
1.試劑影響因素,可能與試劑盒包被抗原組合不同有關。目前第3代雙抗原夾心法試劑的質量優於第2代間接法試劑，具有更好的敏感性和特異性，尤其對感染早期的弱陽性標本,主要包被的抗原的種類及比例，純度有關系。
2.患者自身情況的影響， 患者體內特有的內源件物質可造成假陽性結果，尤其是類風濕因子存在於類風濕關節炎及某些自身免疫性疾病患者血液中，其有與變性的IgG非特異性結合的性質，會與固相反應板上的IgG及酶標記IgG結合造成假陽性。
3.檢測過程中影響因素，如標本溶血，洗滌不徹底，溫浴時間和溫度不夠等都會造成檢測假陽性。
鑒於ELISA假陽性比較多，所以只能作為初篩，陽性必須送疾控中性做確證實驗。

9、elisa法檢測指的什麼?HBSAB顯示陽性（弱）。

ELISA法，又叫雙抗夾心法，是免疫測定的一種方法。HBSAB陽性，說明你有表面抗體，對乙肝有一定免疫力。

10、ELISA檢測方法的原理及其優缺點是什麼

ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由於抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育後，可通過洗滌除去多餘的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用於檢測抗體的間接法(圖a)、用於檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用於檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
優點：操作方便，實驗可靠，缺點：暫未發現