類風濕因子試劑盒

1、ELISA試劑盒中的抗體有哪些

常見的ELISA試劑盒都有:

一、食品安全檢驗ELISA試劑盒

是指食品中的激素、葯物、黴菌毒素、過敏原殘留、轉基因產品的檢測試劑盒，以及微生物、維生素等的檢測產品。

包括植物病毒、細菌、真菌、植物激素和轉基因作物的農業診斷試劑盒，以及動植物疾病診斷類如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類以及寵物類檢測試劑盒。

二、生物原裝ELISA試劑盒以及各類國產ELISA試劑盒

1、細胞因子檢測試劑盒：

如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等

2、心肌梗塞檢測ELISA試劑盒

如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等

3、內分泌檢測ELISA試劑盒

如甲狀腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生長激素，生長抑素，內皮素，皮質醇，骨鈣素，催乳素，促腎上腺皮質激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等等

4、肝纖維化檢測ELISA試劑盒

如纖維連接蛋白，透明質酸，膠原，基質金屬蛋白酶抑制因子，基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等等

5、自身免疫檢測ELISA試劑盒

如甲狀腺，鹽水可提取核抗原抗體(ENA)，抗核抗體，DNA，抗心磷脂抗體，類風濕因子，循環免疫復合物，抗胰島細胞抗體，胰蛋白酶原，Sm，大皰性類皰瘡，蛋白酶，短膜蟲法，肝-腎，肝-腎-胃，肌內膜抗體，角蛋白抗體，抗核抗體，抗核糖體蛋白抗體，抗聚角蛋白微絲蛋白抗體，抗鏈O，抗卵巢抗體，抗平滑肌抗體，抗線粒體抗體，等等

7、優生優育檢測ELISA試劑盒

如早早孕，新生兒TSH，胎膜早破檢測，抗子宮內膜抗體，抗心磷脂抗體，抗透明帶抗體，抗卵細胞透明帶抗體，抗卵巢抗體，抗精子抗體，巨細胞病毒，弓形體，風疹病毒，分娩預測，單核白細胞增多症，單純皰疹病毒，促卵泡素，促黃體生成素，便隱血試紙，HCG等等

8、傳染病檢測ELISA試劑盒

如幽門螺桿菌，乙腦，乙肝，丙肝，丁肝，戊肝，庚肝，衣原體，性病，腺病毒，微小病毒B19，天皰瘡，水痘-帶狀皰疹病毒，生殖支原體，傷寒，沙眼，腮腺炎，人型支原體，麻疹，輪狀病毒，流行性出血熱，淋球菌，萊姆病，柯薩奇，抗解尿支原體，軍團菌，結核，膠原，尖銳濕疣，甲肝，脊髓灰質炎，急性胰腺炎尿胰蛋白酶，霍亂，呼吸道合胞病毒，肝吸蟲，副流感，肺炎，帶狀皰疹，傳染性單核細胞增多症，層粘蛋白，布魯氏桿菌，百日咳，白喉，艾柯病毒，EB 病毒，A族鏈球菌等等

9、特種蛋白檢測ELISA試劑盒

如免疫球蛋白，抗鏈O-aso，類風濕因子RF，C反應蛋白，微量白蛋白，β-2微球蛋白human，鐵蛋白，轉鐵蛋白transferrin等等

10、腫瘤標志物檢測ELISA試劑盒

如腫瘤標志物，組織多肽抗原，腫瘤相關因子，胰腺癌，直腸癌，細胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經特異性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗體，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，大腸癌，肺癌，大小便隱血檢測，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等

2、試劑盒有多少種？ELISA試劑盒是哪種？

試劑盒主要要這么幾個分類：核酸提取純化類，蛋白檢測類，RNA類等，常用的elisa試劑盒就屬於蛋白檢測試劑盒。德晟生化解答

3、雙抗夾心法制備Elisa試劑盒時。怎麼確定包被用抗體濃度？

ELISA所用的包被抗原一般是蛋白質，促使蛋白質同板基質結合的力一般是疏水作用。不同的蛋白因其疏水性不同而有不同的結合常數。由於一般的蛋白其親水基團都在ELISA的原理和類型
1. ELISA的原理
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記.結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性.在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應.用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開.再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上.此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例.加入酶反應的底物後,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析.由於酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度.
2. ELISA的類型
ELISA可用於測定抗原,也可用於測定抗體.在這種測定方法中有三個必要的試劑1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結合物"(conjugate);(3)酶反應的底物.根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設計出各種不類型的檢測方法.用於臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:
2.1 雙抗體夾心法測抗原

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體.洗滌除去未結合的抗體及雜質.
2) 加受檢標本,保溫反應.標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物.洗滌除去其他未結合物質.
3) 加酶標抗體,保溫反應.固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合.徹底洗滌未結合的酶標抗體.此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關.
4) 加底物顯色.固相上的酶催化底物成為有色產物.通過比色,測知標本中抗原的量.在臨床檢驗中,此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法.如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物.如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用於包被固相載體和制備酶結合物.這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測.
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物".類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象,此時反應後顯色的吸光值(位於抗原過剩帶上)與標准曲線(位於抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果將低於實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落.鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果.因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的最高值.用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應.
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物.但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題.
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾.RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合.用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應.採用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由於去除了Fc段,從而消除RF的干擾.雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標(參見6.2).
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心.
2.2 雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似.用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體.與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體.此法中受檢標本不需稀釋,可直接用於測定,因此其敏感度相對高於間接法.乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法.本法關鍵在於酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法.
2.3 間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法.其原理為利用酶標記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法(見圖2-3).操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯結,形成固相抗原.洗滌除去未結合的抗原及雜質.2)加稀釋的受檢血清,保溫反應.血清中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物.經洗滌後,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去.
3)加酶標抗抗體.可用酶標抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體.固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合,從而間接地標記上酶.洗滌後,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關.
4)加底物顯色本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷.間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法.間接法成功的關鍵在於抗原的純度.雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性.特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質,例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發生反應.抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質,例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗中也發生假陽性反應.另外如抗原中含有無關蛋白,也會因竟爭吸附而影響包被效果.
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性.病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分.IgG的吸附性很強,非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面.因此在間接法中,抗原包被後一般用無關蛋白質(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空餘間隙.另外,在檢測過程中標本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結果的判斷.
2.4 競爭法測抗體
當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體.其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合.標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺於陰性反應.如抗原為高純度的,可直接包被固相.如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可採用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然後加入抗原,形成固相抗原.洗滌除去抗原中的雜質,然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應.競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBc ELISA一般採用此法.另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌後再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應.抗HBe的檢測一般採用此法.
2.5 競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以採用競爭法模式.其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合.標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,最後的顯色也愈淺.小分子激素,葯物等ELISA測定多用此法.
2.6 捕獲包被法測抗體
IgM抗體的檢測用於傳染病的早期診斷中.間接法ELISA一般僅適用於檢測總抗體或IgG抗體.如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體,因標本中一般同時存在較高濃度的IgG抗體,後者將競爭結合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結合到固相上.因此如用抗人IgM作為二抗,間接測定IgM抗體,必須先將標本用A蛋白或抗IgG抗體處理,以除去IgG的干擾.在臨床檢驗中測定抗體IgM時多採用捕獲包被法.先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM).然後加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結合.繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體.再與底物作用,呈色即與標本中的IgM成正相關.此法常用於病毒性感染的早期診斷.甲型肝炎病毒(HAV)抗體的檢測模式見圖2-7.類風濕因子(RF)同樣能幹擾捕獲包被法測定IgM抗體,導致假陽性反應.因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功.
2.7 ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)系統(system)的略語.親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成.生物素為小分子化合物,分子量244.用化學方法製成的衍生物素-羥基琥珀醯亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子形成生物素標記產物,標記方法頗為簡便.生物素與親和素的結合具有很強的特異性,其親和力較抗原抗體反應大得多,兩者一經結合就極為穩定.由於一個親和素可與4個生物素分子結合,因此如把ABS與ELISA法可分為酶標記親和素-生物素(LA法和橋聯親和素-生物素(ABC)法兩種類型.兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統中的酶標抗體(抗原).在LAB中,固相生物素先與不標記的親和素反應,然後再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度.在早期,親和素從蛋清中提取,這種卵親和素為鹼性糖蛋白,與聚苯乙烯載體的吸附性很強,用於ELISA中可使本底增高.從鏈黴菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點,在ELISA應用中有替代前者的趨勢.由於ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種試劑,增加了操作步驟,在臨床檢驗中ABS-ELISA應用不多.

4、ELISA試劑盒可以應用在哪些領域

根據進口原裝ELISA試劑盒和各類國產和進口分裝的ELISA試劑盒可以分為下面幾類
1、細胞因子檢測內試劑盒：
如白介容素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等
2、心肌梗塞檢測ELISA試劑盒如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等
3、內分泌檢測ELISA試劑盒
如甲狀腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生長激素，生長抑素，內皮素，皮質醇，骨鈣素，催乳素，促腎上腺皮質激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等等
4、肝纖維化檢測ELISA試劑盒
如纖維連接蛋白，透明質酸，膠原，基質金屬蛋白酶抑制因子，基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等等
5、自身免疫檢測ELISA試劑盒
如甲狀腺，鹽水可提取核抗原抗體(ENA)，抗核抗體，DNA，抗心磷脂抗體，類風濕因子，循環免疫復合物，抗胰島細胞抗體，胰蛋白酶原，Sm，大皰性類皰瘡，ELISA試劑盒蛋白酶，短膜蟲法，肝-腎，肝-腎-胃，肌內膜抗體，角蛋白抗體，抗核抗體，抗核糖體蛋白抗體，抗聚角蛋白微絲蛋白抗體，抗鏈O，抗卵巢抗體，抗平滑肌抗體，抗線粒體抗體，等等。

5、ELISA操作真的很簡單嗎

酶聯免疫吸附試驗(enayme liked immunosorbent assay，ELISA)是20世紀70年代發展起來的一種檢測技術，因其具有敏感性高、特異性強、操作簡單等優點，被廣泛應用於各種抗原和抗體的測定，為輔助臨床診斷與生物科研起到了積極的推動作用。但ELISA測定中影響因素較多，操作過程中每個環節都會對試驗結果產生影響，出現錯誤的結果。現筆者對影響實驗結果的常見因素及相應的控制方法分析探討如下：

1試劑的因素

1.1試劑的選擇

試劑的選擇是保證血液檢測質量的關鍵要素。雖然國家採用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在在差異。要選購知名度相對高、具有「三證」的試劑，不要用無批號的試劑，最好選用與儀器配套的試劑。更不要使用過期的試劑和混用不同批號的試劑。

1.2試劑的准備

在臨床實驗室，對試劑的准備一般不太注意，通常的做法是在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響後面時間不夠的問題，其直接的後果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此，在ELISA測定中試劑的准備最為關鍵的是，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min後，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足後面的測定需求。

2樣本的因素

2.1內源性干擾因素

包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等。

2.1.1類風濕因子在類風濕患者及正常人血清中，常含有較高或不同濃度的類風濕因子(RF)，其一般為IgM型，亦有IgG和IgA型，具有與變性IgG產生非特異結合的特點，因為在ELISA測定中，其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨後加入的酶標的特異抗體IgG結合，從而出現假陽性結果。避免其發生的方法有：①用F(ab)2替代完整的IgG。②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理。③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解。

2.1.2補體在固相酶免疫測定中，來自哺乳動物的固相抗體和酶標二抗均有激活人補體系統的功能。一方面，固相抗體和酶標二抗可因其吸附及結合過程中抗體分子發生變構，使Fc段的補體C1q結合點暴露出來，使C1q成為一個中介物將二者交聯起來出現假陽性結果。另一方面，固相抗體也會因為活化補體的結合，封閉抗體和抗原的表位結合能力而引起假陰性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本。②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活。

2.2外源性干擾因素

包括標本溶血、標本被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全等。

2.2.1標本的溶血血紅蛋白中含鐵血紅素有類過氧化物酶的活性，因此，在以辣根過氧化物酶(HRP)為標志的ELISA測定中，如血清樣本中血紅蛋白濃度較高，則很容易在溫育過程中吸附於固相，從而與後面加入的HRP底物反應顯色。所以在采血時應注意手法，採集的血液勿用力振盪，嚴防標本溶血。

2.2.2標本的污染菌體可能含有內源性辣根過氧化物酶，可使實驗出現非特異性顯色。因此，ELISA檢測宜採集新鮮標本，如不能當時測定，5 d之內應4℃保存，1周後檢測應低溫凍存；同時，收集標本採用無菌試管，可防止標本的污染。

2.2.3標本的保存標本在冰箱中保存過久，血清中IgG可聚合成多聚體，AFP可形成二聚體，在用間接法測定中會導致本底過深，甚至造成假陽性。 冰凍保存的標本反復凍融產生機械剪切力對標本中的蛋白等分子有破壞作用，可引起假陰性結果。因此，ELISA檢測盡量採用新鮮標本，長時凍存的樣本避免反復融凍[3]。

2.2.4標本凝固不全凝固不全的血清中含有部分纖維蛋白原，可使結果呈假陽性。解決的方法有：①於采血管中加入適當的抗凝劑；②將採集後的血液放在架子上再放入37℃水浴中1 h，待充分凝固後再離心分離血清[4]。

3操作中的因素

3.1加樣  孵育前加樣時間過長，酶試劑加出孔外，使用滴瓶滴加試劑時，滴加的角度不同和擠壓的力度不同，致使滴加的試劑量不準，都可導致試驗結果不準確。控制方法：①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；②加酶試劑後，用吸水紙吸干孔外試劑；③作定量試驗時，使用加樣器加註試劑，並經常校正其准確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。

3.2溫育  溫育是ELISA測定最為關鍵、最容易出現問題的步驟。最為常見的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2-8℃。目前國內售ELISA試劑盒溫育時間為37℃，30 min-1 h，進口ELISA試劑盒則通常為37℃，1-2 h能有較完全的結合。

3.2.1溫育時間、溫度的選擇一般根據試劑盒的說明書選擇溫育的時間、溫度。加完樣本和（或）試劑後將微孔板從室溫放入水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃需要一定時間，如果是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就容易造成實際測定中溫育時間不夠，易致弱陽性標本測不出來。控制方法：①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察。

3.2.2 「邊緣效應」的排除「邊緣效應」是在使用96孔板的ELISA測定中，外周孔顯色較中心孔深的現象。產生的原因可能是為96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度造成的，因此在溫育時盡量採用水浴。

3.3洗板 　ELISA測定的洗板一般有兩種方式，即手工和洗板機洗板。採用手工洗板，孔與孔之間液體易交叉，採用半自動洗板機時，洗液量不足導致洗板不徹底，洗板針堵塞導致抽吸不完全，洗板不暢導致清洗效果差。控制方法：①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；③為了洗滌效果好，實驗室可採用機器與人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌後再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數，有資料報道洗板7次能達到理想的洗滌效果[5]。

3.4顯色 　市售ELISA試劑盒中，如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配製且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。

3.5結果判定

讀取結果要在15-30 min內完成，定性測定用肉眼判讀試驗結果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結果，酶標儀不應置於陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。

綜上所述，盡管ELISA法操作簡單，但可能影響測定結果的因素也較多。故在實際操作的過程中，要加強質量管理，認真避免或減少影響因素，力求結果准確，為疾病的診斷和科研提供可靠的依據。

6、試劑盒的分類

主要有： 1.磁珠法核酸提取試劑盒
2.磁珠法提取DNA試劑盒
3.DNA提取試劑盒（離心柱法）
4.磁珠法RNA提取試劑盒
5.RNA提取試劑盒（離心柱法）
6.磁珠法植物基因組DNA提取試劑盒
7.反轉錄試劑盒
8.膠回收試劑盒
9.PCR純化試劑盒
10.病毒核酸提取試劑盒（磁珠法）
11.土壤基因組DNA提取試劑盒
12.法醫樣本DNA提取試劑盒（磁珠法）等 1.elisa
常見elisa試劑盒有：
特種蛋白檢測elisa試劑盒
如免疫球蛋白,抗鏈O-aso,類風濕因子RF,C反應蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,鐵蛋白,轉鐵蛋白transferrin等等
腫瘤標志物檢測elisa試劑盒：
如腫瘤標志物，組織多肽抗原，腫瘤相關因子，胰腺癌，直腸癌，細胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經特異性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗體，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，甲基苯丙胺，大腸癌，肺癌，大小便隱血檢測，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等。
食品安全檢驗elisa試劑盒：
食品中的激素、葯物、黴菌毒素、過敏原殘留、轉基因產品的檢測試劑盒，以及微生物、維生素等的檢測產品。
植物病毒、細菌、真菌、植物激素和轉基因作物的農業診斷試劑盒
動植物疾病診斷類如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類以及寵物類檢測試劑盒
傳染病檢測elisa試劑盒
如幽門螺桿菌,乙腦,乙肝,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,衣原體,性病,腺病毒,微小病毒B19,天皰瘡,水痘-帶狀皰疹病毒,生殖支原體,傷寒,沙眼,腮腺炎,人型支原體,麻疹,輪狀病毒,流行性出血熱,淋球菌,萊姆病,柯薩奇,抗解尿支原體,軍團菌,結核,膠原,尖銳濕疣,甲肝,脊髓灰質炎,急性胰腺炎尿胰蛋白酶,霍亂,呼吸道合胞病毒,肝吸蟲,副流感,肺炎,帶狀皰疹,傳染性單核細胞增多症,層粘蛋白,布魯氏桿菌,百日咳,白喉,艾柯病毒,EB病毒,A族鏈球菌等等。
2.免疫共沉澱試劑盒
3.化學發光試劑盒
4.免疫組化試劑盒
5.放射免疫試劑盒
6.免疫熒光試劑盒 1.細胞凋亡試劑盒
2.葡萄糖檢測試劑盒
3.支原體檢測試劑盒
四、試劑盒使用示例
試劑盒的產生正是為了使實驗人員能夠擺脫繁重的試劑配製及優化過程，所以試劑盒中一般配備有相應的使用說明書，用戶按照說明書不需或只需少量的優化即可得到滿意的結果。
⑴試劑盒使用說明書
說明書一般包括公司標志及名稱、試劑盒名稱、試劑盒組成、保質期、使用領域、使用方法等項目
說明書格式如右圖所示：
①一般在頁眉頁腳處為公司的名稱及標志；
②接下來為試劑盒的名稱；
③試劑盒組成中應為試劑盒中的所有內容，為了簡潔明了，一般以表格的形式表現；
④操作步驟是試劑盒說明書中最重要的部分，內容應准確、簡潔、易懂，不能包含帶有歧義的句子，更不能含糊其辭，排版上操作步驟應將復雜的步驟拆解，使人一目瞭然。可以說操作步驟為試劑盒的靈魂。 試劑盒內容（以離心柱型為例）：
一般包括：裂解液RL
去蛋白液RW1
漂洗液RW
RNase free ddH2O
吸附柱（RNase free）
過濾柱（RNase free）
緩沖液
離心管（RNase free）
收集管（RNase free）
此外，還配有一份試劑盒使用說明書，根據不同的生產商，可能還配有不同的試劑，如：DNA酶、溶菌酶等。
使用時一定要根據自己的實驗需要購買專用提取試劑盒， 如果不是專用試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質量以及完整性，會影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、晶元分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析、分子克隆等後續實驗的結果。
當前提取效果好的是QIANGEN公司生產的RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當然還有其它的進口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內無貨的時候，要從國外發貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現貨，如天根（目前國內生產的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性價比還可以。
當然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實採用一些經典的RNA提取方法，效果也很不錯，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經典的方法操作復雜一些。

7、常見的ELISA試劑盒都有哪些

常見的ELISA試劑盒都有:

一、食品安全檢驗ELISA試劑盒

是指食品中的激素、葯物、黴菌毒素、過敏原殘留、轉基因產品的檢測試劑盒，以及微生物、維生素等的檢測產品。

包括植物病毒、細菌、真菌、植物激素和轉基因作物的農業診斷試劑盒，以及動植物疾病診斷類如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類以及寵物類檢測試劑盒。

二、生物原裝ELISA試劑盒以及各類國產ELISA試劑盒

1、細胞因子檢測試劑盒：

如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等

2、心肌梗塞檢測ELISA試劑盒

如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等

3、內分泌檢測ELISA試劑盒

如甲狀腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生長激素，生長抑素，內皮素，皮質醇，骨鈣素，催乳素，促腎上腺皮質激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等等

4、肝纖維化檢測ELISA試劑盒

如纖維連接蛋白，透明質酸，膠原，基質金屬蛋白酶抑制因子，基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等等

5、自身免疫檢測ELISA試劑盒

如甲狀腺，鹽水可提取核抗原抗體(ENA)，抗核抗體，DNA，抗心磷脂抗體，類風濕因子，循環免疫復合物，抗胰島細胞抗體，胰蛋白酶原，Sm，大皰性類皰瘡，蛋白酶，短膜蟲法，肝-腎，肝-腎-胃，肌內膜抗體，角蛋白抗體，抗核抗體，抗核糖體蛋白抗體，抗聚角蛋白微絲蛋白抗體，抗鏈O，抗卵巢抗體，抗平滑肌抗體，抗線粒體抗體，等等

7、優生優育檢測ELISA試劑盒

如早早孕，新生兒TSH，胎膜早破檢測，抗子宮內膜抗體，抗心磷脂抗體，抗透明帶抗體，抗卵細胞透明帶抗體，抗卵巢抗體，抗精子抗體，巨細胞病毒，弓形體，風疹病毒，分娩預測，單核白細胞增多症，單純皰疹病毒，促卵泡素，促黃體生成素，便隱血試紙，HCG等等

8、傳染病檢測ELISA試劑盒

如幽門螺桿菌，乙腦，乙肝，丙肝，丁肝，戊肝，庚肝，衣原體，性病，腺病毒，微小病毒B19，天皰瘡，水痘-帶狀皰疹病毒，生殖支原體，傷寒，沙眼，腮腺炎，人型支原體，麻疹，輪狀病毒，流行性出血熱，淋球菌，萊姆病，柯薩奇，抗解尿支原體，軍團菌，結核，膠原，尖銳濕疣，甲肝，脊髓灰質炎，急性胰腺炎尿胰蛋白酶，霍亂，呼吸道合胞病毒，肝吸蟲，副流感，肺炎，帶狀皰疹，傳染性單核細胞增多症，層粘蛋白，布魯氏桿菌，百日咳，白喉，艾柯病毒，EB 病毒，A族鏈球菌等等

9、特種蛋白檢測ELISA試劑盒

如免疫球蛋白，抗鏈O-aso，類風濕因子RF，C反應蛋白，微量白蛋白，β-2微球蛋白human，鐵蛋白，轉鐵蛋白transferrin等等

10、腫瘤標志物檢測ELISA試劑盒

如腫瘤標志物，組織多肽抗原，腫瘤相關因子，胰腺癌，直腸癌，細胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經特異性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗體，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，大腸癌，肺癌，大小便隱血檢測，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等

8、擴增陽性Sars-cov-2是什麼意思∵？

目前全球約有400萬人感染嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒型（SARS-CoV-2），超過26萬人死於2019冠狀病毒病（COVID-19）並發症。這種流行病給患者、醫療保健提供者和決策者帶來了嚴重挑戰。根據患者過去和現在的醫療特點，及時將患者分為風險組，可以更好地應對其中的許多挑戰。為了可靠地識別風險增加（或降低）的患者可以指導臨床決策(例如住院與家庭護理）、公共衛生政策(例如，基於風險的隔離）和准備工作(例如，需要預期的醫療設備）。

有人提出了各種演算法來識別有COVID-19（嚴重）並發症風險的患者。疾病控制和預防中心（CDC）認定，65歲及以上、居住在養老院或長期護理機構、或患有基礎疾病（特別是如果控制不好的話）的個人有可能患上COVID-19的嚴重疾病，一些研究列出了70歲以上和一些潛在的條件作為關鍵疾病的危險因素。另一項研究稱包括實體器官移植接受者、特定癌症或嚴重呼吸系統疾病患者、患有嚴重心臟病的孕婦以及感染風險增加的患者(例如由於免疫抑制治療）是COVID-19風險組。此外，70歲以上的患者和那些患有一些潛在健康狀況的患者(例如慢性呼吸系統疾病，體重指數≥40，孕婦）被認為是一個更廣泛的弱勢群體（也稱為「流感群體」）。

最近的一項研究，以色列的研究團隊分析了以色列所有SARS-CoV-2陽性患者的病歷，比較了復雜人群和非復雜人群的患病率，並確定與COVID-19並發症相關的不同年齡和性別的情況，並分析強調了特定階層的危險因素，可能有助於更好地識別不同人群中的危險患者。

研究團隊的分析所強調的許多情況以前已經報道過，並且是常用的危險定義的一部分，包括高血壓、肥胖、腎臟和心血管疾病。然而，也確定了一些額外的危險因素，尤其是18-50歲的男性抑鬱患者以及65歲或65歲以上認知和神經障礙患者。這些增加可能在一定程度上與65歲以上年齡組的不同年齡分布有關。盡管如此，有了一些初步的支持，它們可能在未來的研究中值得更多的考慮。

綜上所述，可靠地確定COVID-19並發症風險增加的患者可以指導臨床決策、公共衛生政策和准備工作。迄今為止，全球公認的高危患者定義主要依賴於住院COVID-19患者的流行病學特徵。分析表明，心血管和腎臟疾病、肥胖和高血壓是COVID-19並發症的重要危險因素，18-50歲的男性抑鬱患者以及65歲或65歲以上認知和神經障礙患者是顯著的危險因素，吸煙和呼吸系統疾病的病史不會顯著增加並發症的風險。根據這些觀察結果，調整現有的風險定義可能會提高其准確性，並影響全球遏制大流行的努力。

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9、一般常見的ELISA試劑盒有哪些種類

1、細胞因子檢測試劑盒：
如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等
2、心肌梗塞檢測試劑盒：
如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等
3、內分泌檢測試劑盒：
如甲狀腺,胰腺,性激素,孕酮,睾酮,生長激素,生長抑素,內皮素,皮質醇,骨鈣素,催乳素,促腎上腺皮質激素,促卵泡素,雌二醇，雌三醇等等
4、肝纖維化檢測試劑盒：
如纖維連接蛋白，透明質酸，膠原，基質金屬蛋白酶抑制因子，基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等等
5、自身免疫檢測試劑盒：
如甲狀腺,抗核抗體,類風濕因子,循環免疫復合物,抗胰島細胞抗體等等
6、腫瘤標志物檢測試劑盒：
如腫瘤標志物，組織多肽抗原，腫瘤相關因子等等
7、優生優育檢測試劑盒：
8、傳染病檢測試劑盒
如百日咳,EB病毒,A族鏈球菌等等
9、特種蛋白檢測試劑盒
如免疫球蛋白,抗鏈O-aso,類風濕因子RF,C反應蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,鐵蛋白,轉鐵蛋白transferrin等

10、試劑盒特異性可以理解為干擾物質嗎

ELISA所用的包被抗原一般是蛋白質，促使蛋白質同板基質結合的力一般是疏水作用。不同的蛋白因其疏水性不同而有不同的結合常數。由於一般的蛋白其親水基團都在ELISA的原理和類型
1. ELISA的原理
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記.結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性.在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應.用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開.再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上.此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例.加入酶反應的底物後,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析.由於酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度.
2. ELISA的類型
ELISA可用於測定抗原,也可用於測定抗體.在這種測定方法中有三個必要的試劑1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結合物"(conjugate);(3)酶反應的底物.根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設計出各種不類型的檢測方法.用於臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:
2.1 雙抗體夾心法測抗原

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體.洗滌除去未結合的抗體及雜質.
2) 加受檢標本,保溫反應.標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物.洗滌除去其他未結合物質.
3) 加酶標抗體,保溫反應.固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合.徹底洗滌未結合的酶標抗體.此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關.
4) 加底物顯色.固相上的酶催化底物成為有色產物.通過比色,測知標本中抗原的量.在臨床檢驗中,此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法.如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物.如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用於包被固相載體和制備酶結合物.這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測.
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物".類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象,此時反應後顯色的吸光值(位於抗原過剩帶上)與標准曲線(位於抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果將低於實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落.鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果.因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的最高值.用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應.
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物.但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題.
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾.RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合.用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應.採用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由於去除了Fc段,從而消除RF的干擾.雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標(參見6.2).
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心.
2.2 雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似.用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體.與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體.此法中受檢標本不需稀釋,可直接用於測定,因此其敏感度相對高於間接法.乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法.本法關鍵在於酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法.
2.3 間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法.其原理為利用酶標記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法(見圖2-3).操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯結,形成固相抗原.洗滌除去未結合的抗原及雜質.2)加稀釋的受檢血清,保溫反應.血清中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物.經洗滌後,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去.
3)加酶標抗抗體.可用酶標抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體.固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合,從而間接地標記上酶.洗滌後,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關.
4)加底物顯色本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷.間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法.間接法成功的關鍵在於抗原的純度.雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性.特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質,例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發生反應.抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質,例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗中也發生假陽性反應.另外如抗原中含有無關蛋白,也會因竟爭吸附而影響包被效果.
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性.病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分.IgG的吸附性很強,非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面.因此在間接法中,抗原包被後一般用無關蛋白質(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空餘間隙.另外,在檢測過程中標本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結果的判斷.
2.4 競爭法測抗體
當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體.其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合.標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺於陰性反應.如抗原為高純度的,可直接包被固相.如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可採用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然後加入抗原,形成固相抗原.洗滌除去抗原中的雜質,然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應.競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBc ELISA一般採用此法.另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌後再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應.抗HBe的檢測一般採用此法.
2.5 競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以採用競爭法模式.其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合.標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,最後的顯色也愈淺.小分子激素,葯物等ELISA測定多用此法.
2.6 捕獲包被法測抗體
IgM抗體的檢測用於傳染病的早期診斷中.間接法ELISA一般僅適用於檢測總抗體或IgG抗體.如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體,因標本中一般同時存在較高濃度的IgG抗體,後者將競爭結合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結合到固相上.因此如用抗人IgM作為二抗,間接測定IgM抗體,必須先將標本用A蛋白或抗IgG抗體處理,以除去IgG的干擾.在臨床檢驗中測定抗體IgM時多採用捕獲包被法.先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM).然後加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結合.繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體.再與底物作用,呈色即與標本中的IgM成正相關.此法常用於病毒性感染的早期診斷.甲型肝炎病毒(HAV)抗體的檢測模式見圖2-7.類風濕因子(RF)同樣能幹擾捕獲包被法測定IgM抗體,導致假陽性反應.因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功.
2.7 ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)系統(system)的略語.親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成.生物素為小分子化合物,分子量244.用化學方法製成的衍生物素-羥基琥珀醯亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子形成生物素標記產物,標記方法頗為簡便.生物素與親和素的結合具有很強的特異性,其親和力較抗原抗體反應大得多,兩者一經結合就極為穩定.由於一個親和素可與4個生物素分子結合,因此如把ABS與ELISA法可分為酶標記親和素-生物素(LA法和橋聯親和素-生物素(ABC)法兩種類型.兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統中的酶標抗體(抗原).在LAB中,固相生物素先與不標記的親和素反應,然後再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度.在早期,親和素從蛋清中提取,這種卵親和素為鹼性糖蛋白,與聚苯乙烯載體的吸附性很強,用於ELISA中可使本底增高.從鏈黴菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點,在ELISA應用中有替代前者的趨勢.由於ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種試劑,增加了操作步驟,在臨床檢驗中ABS-ELISA應用不多.